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          MCF10A-人乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A
          • MCF10A-人乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A
          舉報(bào)

          貨物所在地:上海上海市

          更新時(shí)間:2024-05-20 21:00:06

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          細(xì)胞特性:
          1) 來源:人
          2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
          3) 含量:&gt;1x106 細(xì)胞數(shù)
          4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
          5) 用途:僅供科研使用。




             MCF-10A 人乳腺上皮細(xì)胞    

                 【MCF10A; MCF-10 Attached; Michigan Cancer Foundation-10A

          l 細(xì)胞鑒定

          STR鑒定已通過

          l 細(xì)胞來源

          國(guó)家資源庫(kù)

          l 細(xì)胞背景

          來源于一位36碎白人女性,MCF 10A 來源于群體中的貼壁細(xì)胞。MCF 10A 細(xì)胞系是一種非致瘤性上皮細(xì)胞系。細(xì)胞上皮唾液黏蛋白、細(xì)胞角蛋白和乳脂肪球抗原呈陽(yáng)性。它們?cè)谀z原蛋白中表現(xiàn)出三維生長(zhǎng),并在融合培養(yǎng)物中形成圓頂。到目前為止,細(xì)胞沒有顯示出終末分化或衰老的跡象。該線對(duì)胰島素、糖皮質(zhì)激素、霍亂腸毒素和表皮生長(zhǎng)因子 (EGF) 有反應(yīng)。通過電子顯微鏡,細(xì)胞顯示管腔導(dǎo)管細(xì)胞的特征,但不顯示肌上皮細(xì)胞的特征。它們還表達(dá)通過與 MFA-Breast MC-5 單克隆抗體的陽(yáng)性反應(yīng)檢測(cè)到的乳腺特異性抗原。培養(yǎng)基中的鈣含量對(duì)細(xì)胞的形態(tài)有很強(qiáng)的影響。

          l 培養(yǎng)條件

          1)準(zhǔn)備MEGM kit培養(yǎng)基 (Lonza/Clonetics,CC-3150)備注:培養(yǎng)基包含(A+B

          A :  MEBM基礎(chǔ)培養(yǎng)液 (貨號(hào)CC-3151        

          B:  細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑 5管 (貨號(hào)CC-4136        5

          1)  CC-4009G      BPE            2.0ml

          2)  CC-4017G      hEGF           0.5ml

          3)  CC-4021G      INSULIN        0.5ml

          4)  CC-4031G    HYDROCORTISONE  0.5ml

          5)  CC-4081G      GA-1000         0.5ml

          C: 霍亂毒素(cholera toxin)(awcell-8070(100ng/ml) 500 ul

          D:  P/S青霉素-鏈霉素 (awcell-15140-122        5 ml

          2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,100%; 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

          l 注意事項(xiàng):

          1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

          2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

          3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

          3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

          4)運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

          l 運(yùn)輸形式

          低溫:11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

          常溫2 T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

          l 生物安全

          1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

          2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。


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