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逸漠生物細胞復蘇儀（培養(yǎng)儀器）

一、產(chǎn)品說明

逸漠生物細胞復蘇儀（培養(yǎng)儀器）

貨號SCT-300

解凍時間≤3分鐘

貨期現(xiàn)貨

通道數(shù)量3個1.8~2.0 mL可立凍存管

單管典型容量0.8~1.5 mL

樣品臺控精度≤±1.0℃

二、細胞培養(yǎng)操作

收貨方式T25瓶凍存管

收貨處理觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)收到細胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例傳代建議1：2傳代

1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存;

2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞。

到貨須知1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2.靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照)，記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

3.由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

備注：客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務電話

三、細胞凍存操作

凍存液配方無血清凍存液，液氮儲存

細胞密度待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

凍存方法a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

四、售后服務

重發(fā)標準1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā);

2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā);

3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā);

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā);

5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā);

6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā);

7.視具體情況而定。

不予重發(fā)1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā);

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā);

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā);

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā);

5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā);

6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā);

7.視具體情況而定。