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NK-92MI（人惡性非霍奇金淋巴瘤殺傷細(xì)胞）

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱：NK-92MI（人惡性非霍奇金淋巴瘤殺傷細(xì)胞）

種屬來源：人

組織來源：外周血

細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

生長特性：懸浮生長

培養(yǎng)基:：在不含核糖核酸苷和脫氧核糖核酸苷，但含有2mm L-谷氨酰an和1.5 g/L碳酸氫na的Alpha Minimum Essential medium(αMEM)中加入以下成分：0.2 mM肌醇;0.1 mM β巰基乙醇;0.02 mM葉suan;終濃度為12.5%的馬血清(HS)和12.5%的胎牛血清(FBS)+1%PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

支原體檢測(cè)：無

注：1.該細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時(shí)間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時(shí)密度盡量大些。

2. 培養(yǎng)過程中有少量細(xì)胞分泌物屬于正?，F(xiàn)象，不影響細(xì)胞生長。

3. 傳細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久，最好小于1 h

4. 重懸細(xì)胞要輕柔，不要太劇烈

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細(xì)胞：37℃水浴融化后，850 rpm離心5 min，棄凍存液，加入培養(yǎng)基重懸，在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，起始密度為每毫升2-3×105個(gè)細(xì)胞

2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞粗略混勻，取細(xì)胞計(jì)數(shù)，按每毫升2-3×105個(gè)活細(xì)胞的細(xì)胞密度進(jìn)行全換液或半換液。每48 h傳一次。

3)細(xì)胞凍存：凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%完培養(yǎng)基，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，取1×106~1×107個(gè)細(xì)胞，850 rpm離心5 min，棄原培養(yǎng)基，加入1 mL凍存液，輕輕混勻，標(biāo)注封口后，放入凍存盒，置于-80℃ 24 h，隔天再置于液氮?dú)庀蟆?/p>

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

懸浮細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

1、收貨時(shí)需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))

2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度

c.如密度90%，建議傳代

3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。