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重要的洗滌:
* 不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高,懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
關(guān)鍵的封閉:
* 封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果背景過高,懷疑封閉不充分,那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
抗體濃度須優(yōu)化:
* 如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測(cè)試劑要適量:
* 切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會(huì)導(dǎo)致高背景。ELISA試劑盒也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。只有確保每一步操作都做到位,才會(huì)呈現(xiàn)wan美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以ELISA實(shí)驗(yàn)的每一步都很重要,不可以掉以輕心。
天津睿創(chuàng)生物科技有限公司長(zhǎng)期致力于銷售研發(fā)ELISA試劑盒,涵蓋種屬眾多,指標(biāo)齊全。擁有成熟的技術(shù)團(tuán)隊(duì)和一套嚴(yán)格的服務(wù)指導(dǎo)方針以保證員工具備較高的職業(yè)素質(zhì)和技術(shù)水平,從而從整體上提高服務(wù)質(zhì)量和分析問題、解決問題的能力,大大提升了服務(wù)水平和客戶對(duì)服務(wù)的滿意程度,歡迎咨詢!
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