人過氧化氫酶(CAT) ELISA 試劑盒

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒組成

實驗步驟

1. 準備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應(yīng)孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標二抗：每孔加入50μl酶標二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應(yīng)：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。

人過氧化氫酶(CAT) ELISA 試劑盒

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向?qū)?，在“標準類?中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成。可得曲線圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標儀應(yīng)使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

合作單位:

中國醫(yī)科大學、復旦大學、北京大學、貴陽醫(yī)學院、中國農(nóng)業(yè)大學

天津疾控中心、江南大學、山東大學、青島大學、香港大學

云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院