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更新時(shí)間:2024-09-08 21:36:34瀏覽次數(shù):260次
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人真核翻譯起始因子3a(eIF3a) ELISA 試劑盒
試劑盒性能:
1. 檢測(cè)范圍:1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 靈敏度:檢測(cè)濃度小于0.78 nmol/L。
3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,最好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
人真核翻譯起始因子3a(eIF3a) ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣品收集與處理
(1)根據(jù)需要收集不同種類的樣品,如血清、血漿、尿液等。
(2)對(duì)于血清和血漿樣品,將采集的血液靜置一段時(shí)間后,離心分離出血清或血漿。
(3)對(duì)于尿液樣品,收集尿液后,可直接進(jìn)行檢測(cè)。
2. 樣品稀釋
根據(jù)試劑盒說明,對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。
3. 加樣
(1)按照試劑盒說明,分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。
(2)每孔加入50μL,輕輕震蕩混勻。
4. 封閉
根據(jù)試劑盒說明,加入適量的封閉液,覆蓋板孔,并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液,可以降低非特異性結(jié)合的影響。
5. 洗滌
(1)將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中,輕輕震蕩,然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次,每次用洗滌液充分洗滌
(2)最后一次洗滌后,用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。
6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育
(1)根據(jù)試劑盒說明,將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。
(2)孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
7. 洗滌與顯色
(1)重復(fù)步驟5的洗滌過程。
(2)加入顯色劑,孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)
(1)加入終止液,終止酶促反應(yīng)。
(2)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值(OD值)。
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公司介紹
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