人粘蛋白5B(MUC5B) ELISA 試劑盒   

試劑盒性能：

1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

樣本實驗準(zhǔn)備

        在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

    檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

人粘蛋白5B(MUC5B) ELISA 試劑盒  

實驗步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對于尿液樣品，收集尿液后，可直接進(jìn)行檢測。

2. 樣品稀釋

根據(jù)試劑盒說明，對需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說明，分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

根據(jù)試劑盒說明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說明，將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標(biāo)儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值（OD值）。

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