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人激肽原1(KNG1) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說(shuō)明書(shū)提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

操作步驟

1. 包被：將抗原溶液加入聚苯乙烯酶標(biāo)板孔中，包被抗原，37℃孵育1小時(shí)。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，37℃孵育30分鐘，以封閉酶標(biāo)板上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，37℃孵育1小時(shí)。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，37℃孵育1小時(shí)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

9. 顯色：加入TMB底物溶液，37℃孵育15-30分鐘。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止顯色反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：在450nm波長(zhǎng)下讀取吸光度值（OD值）。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說(shuō)明，確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，請(qǐng)務(wù)必遵循實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)及時(shí)清洗并整理實(shí)驗(yàn)器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，如有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。

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