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更新時間:2024-09-09 09:12:40瀏覽次數(shù):334次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)猴β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫試劑盒
猴神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG-2)ELISA試劑盒
猴早期生長應(yīng)答蛋白4(EGR4)酶聯(lián)免疫試劑盒
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猴白介素24 (IL-24)酶聯(lián)免疫試劑盒
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
檢測前準(zhǔn)備工作
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. 生物su化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計),實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計),實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當(dāng)日使用。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好所有試劑、材料和器具。
2. 溫育:將包被有特異性抗體的酶標(biāo)板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。
3. 加樣:分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本,輕輕混勻。
4. 溫育:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。
5. 洗滌:清洗酶標(biāo)板,除去未結(jié)合的抗原抗體。
6. 加酶標(biāo)二抗:向各孔中加入酶標(biāo)二抗,輕輕混勻。
7. 溫育:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。
8. 洗滌:清洗酶標(biāo)板,除去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。
9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,輕輕混勻。
10. 顯色:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。
11. 終止:向各孔中加入終止液,混勻。
12. 測量:在450nm波長下測量各孔的光密度值(OD值)。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存于2-8℃,切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。
2. 實(shí)驗(yàn)前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。
3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。
4. 洗滌時要保證充分洗滌,避免殘留物影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5. 底物溶液應(yīng)避光保存,避免長時間暴露于空氣中。
6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長進(jìn)行讀數(shù),其他波長可能導(dǎo)致誤差。
7. 本試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)和診斷參考,不適用于臨床診斷和治療。
猴白介素24 (IL-24)酶聯(lián)免疫試劑盒
洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5次。
2.自動洗板機(jī):每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
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