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猴核孔蛋白205kda(NUP205)ELISA試劑盒

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

檢測前準(zhǔn)備工作

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。

4. 生物su化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

實驗步驟

1. 準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育：將包被有特異性抗體的酶標(biāo)板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣：分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，輕輕混勻。

4. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的抗原抗體。

6. 加酶標(biāo)二抗：向各孔中加入酶標(biāo)二抗，輕輕混勻。

7. 溫育：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌：清洗酶標(biāo)板，除去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

9. 加底物溶液：向各孔中加入底物溶液，輕輕混勻。

10. 顯色：將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止：向各孔中加入終止液，混勻。

12. 測量：在450nm波長下測量各孔的光密度值（OD值）。

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長進(jìn)行讀數(shù)，其他波長可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

猴核孔蛋白205kda(NUP205)ELISA試劑盒

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

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1、細(xì)胞運輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

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