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更新時(shí)間:2024-09-09 09:38:19瀏覽次數(shù):240次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)猴β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫試劑盒
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猴粘蛋白17(MUC17)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán),能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。
2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合:將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng):當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí),酶能夠催化底物分解,產(chǎn)生顏色變化。通過測(cè)量顏色的變化程度,可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。
猴粘蛋白17(MUC17)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒
樣本處理
1.組織取出前盡量進(jìn)行心臟灌流
2.組織表面不能有毛發(fā)等不相關(guān)組分
3.組織稱重(mg)后立即放入EP管中
4.向EP管中加入9倍量的PBS (μL)
5.用勻漿機(jī)進(jìn)行組織勻漿
6.離心
7.小心吸取上清
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 準(zhǔn)備試劑盒:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘以上,使試劑盒恢復(fù)至室溫。
2. 加樣:分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和空白孔,每孔加入50μl。
3. 孵育:用封板膠紙封住反應(yīng)孔,輕輕振蕩混勻,37℃孵育1小時(shí)。
4. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
5. 加酶標(biāo)二抗:每孔加入50μl酶標(biāo)二抗溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育30分鐘。
6. 洗滌:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育15-20分鐘。
8. 終止反應(yīng):每孔加入50μl終止液,輕輕振蕩混勻。
9. 讀數(shù):用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值。
標(biāo)本的稀釋原則:首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N"倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N"。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物su標(biāo)記抗體的稀釋原則:臨用前以生物su標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標(biāo)記抗體加990μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說明,確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,請(qǐng)務(wù)必遵循實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作,并注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性。
3. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)及時(shí)清洗并整理實(shí)驗(yàn)器具,避免交叉污染。
5. 本試劑盒僅供體外診斷使用,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書,如有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。
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