猴N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯(lián)免疫試劑盒

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應(yīng)用：ELISA實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過(guò)酶對(duì)底物反應(yīng)的顯色反應(yīng)，對(duì)樣本中的待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣等特點(diǎn)，因此在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

試劑盒性能

 檢測(cè)范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。

 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說(shuō)明書(shū)提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

猴N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯(lián)免疫試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測(cè)樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 抗原和抗體的儲(chǔ)存：應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫環(huán)境中。同時(shí)要保證試劑盒未過(guò)期，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2. 加樣技術(shù)：加樣時(shí)應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時(shí)應(yīng)在每孔的旁邊放置一個(gè)加樣對(duì)照孔，以監(jiān)測(cè)加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

3. 溫育：溫育是ELISA實(shí)驗(yàn)中的重要步驟，溫育時(shí)間和溫度的控制對(duì)于抗原抗體反應(yīng)的進(jìn)行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。洗滌時(shí)應(yīng)保證每次洗滌時(shí)間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時(shí)要避免在洗滌過(guò)程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

實(shí)驗(yàn)室安全

1. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期進(jìn)行安全檢查，確保設(shè)備、設(shè)施完好有效。

2. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按規(guī)定配備消防器材、急救箱等安全設(shè)施，并定期檢查其使用狀態(tài)。

3. 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得擅自更改電器線路或使用未經(jīng)批準(zhǔn)的電器設(shè)備。

4. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的消防通道、安全出口等應(yīng)保持暢通無(wú)阻，嚴(yán)禁堆放雜物。

5. 在進(jìn)行高溫、低溫、高壓、真空等危險(xiǎn)性實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須采取相應(yīng)的安全措施，確保人員和設(shè)備安全。

6. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁吸煙和吃東西，以免引起火災(zāi)或中毒等安全事故。

7. 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持安靜，不得大聲喧嘩或擅自離崗，以免影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行和實(shí)驗(yàn)室的安全。

8. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的門(mén)窗、玻璃等易損部位應(yīng)保持完好無(wú)損，如有損壞應(yīng)及時(shí)報(bào)修。

9. 在進(jìn)行易燃、易爆、有毒、有害或其他危險(xiǎn)性實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須至少有兩人同時(shí)在場(chǎng)，以便相互照應(yīng)和應(yīng)對(duì)突發(fā)情況。

10. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的儀器、試劑等應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行標(biāo)識(shí)和管理，以確保使用正確和安全可靠。

11. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持適宜的溫度和濕度，避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和設(shè)備的正常運(yùn)行。

12. 在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得私自拆卸或修理設(shè)備儀器，如有需要應(yīng)請(qǐng)專業(yè)人員協(xié)助處理。

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