猴葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)酶聯(lián)免疫試劑盒 

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應用：ELISA實驗

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應的免疫學檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過酶對底物反應的顯色反應，對樣本中的待測物質(zhì)進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫(yī)學研究、臨床診斷和食品安全檢測等領(lǐng)域得到了廣泛應用。

試劑盒性能

 檢測范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 靈敏度：檢測濃度小于1.0 pg/mL。

 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

準備工作

1.孔板室溫平衡1小時

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準備各型號的移液槍、槍頭、量筒

5.準備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本xi釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說明書提示，溶解標準品

11.配制不同濃度的標準品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預實驗結(jié)果稀釋樣本

14.準備好封板膜

猴葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(GLUT4)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結(jié)合位點，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的酶標抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存：應嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結(jié)果。

2. 加樣技術(shù)：加樣時應保證加入的體積準確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復性。

3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應的進行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

實驗室安全

1. 實驗室應定期進行安全檢查，確保設(shè)備、設(shè)施完好有效。

2. 實驗室應按規(guī)定配備消防器材、急救箱等安全設(shè)施，并定期檢查其使用狀態(tài)。

3. 在實驗室內(nèi)不得擅自更改電器線路或使用未經(jīng)批準的電器設(shè)備。

4. 實驗室內(nèi)的消防通道、安全出口等應保持暢通無阻，嚴禁堆放雜物。

5. 在進行高溫、低溫、高壓、真空等危險性實驗時，必須采取相應的安全措施，確保人員和設(shè)備安全。

6. 實驗室內(nèi)嚴禁吸煙和吃東西，以免引起火災或中毒等安全事故。

7. 在實驗室內(nèi)應保持安靜，不得大聲喧嘩或擅自離崗，以免影響實驗的進行和實驗室的安全。

8. 實驗室內(nèi)的門窗、玻璃等易損部位應保持完好無損，如有損壞應及時報修。

9. 在進行易燃、易爆、有毒、有害或其他危險性實驗時，必須至少有兩人同時在場，以便相互照應和應對突發(fā)情況。

10. 實驗室內(nèi)的儀器、試劑等應按規(guī)定進行標識和管理，以確保使用正確和安全可靠。

11. 實驗室內(nèi)應保持適宜的溫度和濕度，避免影響實驗結(jié)果和設(shè)備的正常運行。

12. 在實驗室內(nèi)不得私自拆卸或修理設(shè)備儀器，如有需要應請專業(yè)人員協(xié)助處理。

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