猴胱天蛋白酶10(CASP10)酶聯(lián)免疫試劑盒 

檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。

3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品：取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 

4. 生物su化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。

5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

當日使用。

猴胱天蛋白酶10(CASP10)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實驗原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學基團，能夠與待測抗原或抗體特異性結合。

2. 酶標記的抗體或抗原的結合：將酶標記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結合，形成酶標記的抗原-抗體復合物。酶標記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復合物。

3. 底物顯色反應：當酶標記的抗原-抗體復合物與底物溶液接觸時，酶能夠催化底物分解，產生顏色變化。通過測量顏色的變化程度，可以判斷待測抗原或抗體的濃度。

操作步驟：

1. 加樣：設置空白孔、標準孔和待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。每次實驗都應制作標準曲線。如果樣品濃度過高，可以用樣品稀釋液進行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標記抗體加99μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物su標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復至室溫。

3. 加樣時注意避免產生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結果。

5. 底物溶液應避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標儀應使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向導，在“標準類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計算濃度：

第一次實驗：

標準曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

為例，已知OD值，計算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

結果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

說明：

1. 由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。

2. 最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

3. 不同批次的同一產品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。

公司簡介

      上海篤瑪生物科技有限公司是一家國內合資集科研和生產為一體的專業(yè)化生物公司。專業(yè)提供各類進口品牌，研發(fā)生產ELISA試劑盒、細胞株、抗體、耗材、培養(yǎng)基等產品，并提供實驗外包，技術指導，操作指導，代做實驗，代做課題等技術服務。公司擁研發(fā)團隊、研發(fā)平臺及現(xiàn)代化的生產基地，生產各類科研用的產品。 我們由衷的感謝海內外科學家、感謝國內外廣大科研工作者、學者予以我們鼎力的支持和理解，我們將在未來的工作中，百尺竿頭，發(fā)揮優(yōu)勢，勇于開拓、自主創(chuàng)新、敢為人先、鍥而不舍，在生命科學的道路上，不斷進取，奮發(fā)努力，瞄準國際生命科學的前沿，不斷創(chuàng)新研發(fā)新產品。為科研工作提供更好、更人性化的服務。

Shanghai Duma Biotechnology Co., Ltd. is a specialized domestic joint venture that integrates scientific research and production. We specialize in providing various imported brands, researching and developing ELISA kits, cell lines, antibodies, consumables, culture media, and other products. We also provide technical services such as experimental outsourcing, technical guidance, operation guidance, and agency experiments and research projects. The company has a world-class R&D team, leading technology, cutting-edge R&D platforms, and modern production bases, producing various scientific research products. We sincerely thank scientists at home and abroad, as well as researchers and scholars at home and abroad for their strong support and understanding. In our future work, we will take full advantage of our strengths, be brave in exploration, independent innovation, dare to be the first, and persevere. On the path of life science, we will continue to strive and strive, aiming at the forefront of international life science, and constantly innovate and develop new products. To provide better and more humane services for scientific research work.

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