猴L(fēng)選擇素(SELL)酶聯(lián)免疫試劑盒  

檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。

3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品：取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 

4. 生物su化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

猴L(fēng)選擇素(SELL)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實驗原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團，能夠與待測抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結(jié)合，形成酶標記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過測量顏色的變化程度，可以判斷待測抗原或抗體的濃度。

操作步驟：

1. 加樣：設(shè)置空白孔、標準孔和待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。每次實驗都應(yīng)制作標準曲線。如果樣品濃度過高，可以用樣品稀釋液進行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標記抗體加99μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物su標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標儀應(yīng)使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向?qū)В凇皹藴暑愋?中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計算濃度：

第一次實驗：

標準曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

為例，已知OD值，計算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應(yīng)的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

說明：

1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準備充足的標本備份。

3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。

公司簡介

      上海篤瑪生物科技有限公司是一家國內(nèi)合資集科研和生產(chǎn)為一體的專業(yè)化生物公司。專業(yè)提供各類進口品牌，研發(fā)生產(chǎn)ELISA試劑盒、細胞株、抗體、耗材、培養(yǎng)基等產(chǎn)品，并提供實驗外包，技術(shù)指導(dǎo)，操作指導(dǎo)，代做實驗，代做課題等技術(shù)服務(wù)。公司擁研發(fā)團隊、研發(fā)平臺及現(xiàn)代化的生產(chǎn)基地，生產(chǎn)各類科研用的產(chǎn)品。 我們由衷的感謝海內(nèi)外科學(xué)家、感謝國內(nèi)外廣大科研工作者、學(xué)者予以我們鼎力的支持和理解，我們將在未來的工作中，百尺竿頭，發(fā)揮優(yōu)勢，勇于開拓、自主創(chuàng)新、敢為人先、鍥而不舍，在生命科學(xué)的道路上，不斷進取，奮發(fā)努力，瞄準國際生命科學(xué)的前沿，不斷創(chuàng)新研發(fā)新產(chǎn)品。為科研工作提供更好、更人性化的服務(wù)。

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