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上海市
96T 2500元 1000盒可售
48T 1450元 1000盒可售
更新時間:2024-09-09 17:09:02瀏覽次數(shù):173次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)豬B細(xì)胞淋巴瘤因子10(Bcl-10) ELISA 試劑盒
供貨周期 | 一周 |
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猴線粒體乙醛脫氫酶(ALDM)酶聯(lián)免疫試劑盒
實驗原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán),能夠與待測抗原或抗體特異性結(jié)合。
2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合:將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測抗原或抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng):當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時,酶能夠催化底物分解,產(chǎn)生顏色變化。通過測量顏色的變化程度,可以判斷待測抗原或抗體的濃度。
猴線粒體乙醛脫氫酶(ALDM)酶聯(lián)免疫試劑盒
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
標(biāo)本的稀釋原則:首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計算濃度時,稀釋了“N"倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N"。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物su標(biāo)記抗體的稀釋原則:臨用前以生物su標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標(biāo)記抗體加990μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
操作步驟:
1. 加樣:設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl。注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。每次實驗都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過高,可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
3. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物su標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
5. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
實驗注意事項
1. 抗原和抗體的儲存:應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求存放抗原和抗體,避免反復(fù)凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期,以獲得可靠的實驗結(jié)果。
2. 加樣技術(shù):加樣時應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡,避免加在孔壁的邊緣,以免影響與固相表面的接觸。加樣時應(yīng)在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔,以監(jiān)測加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
3. 溫育:溫育是ELISA實驗中的重要步驟,溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應(yīng)的進(jìn)行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行溫育,并注意保持恒溫狀態(tài)。
4. 洗滌:洗滌是ELISA實驗中的一步,它可以去除未結(jié)合的物質(zhì),提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應(yīng)保證每次洗滌時間充足,并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡,以免影響洗滌效果。
產(chǎn)品包裝:盒裝
性狀:瓶裝液體
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
保存期限:6個月
運輸條件:2-8℃低溫運輸,用干冰或者生物冰袋低溫運輸。
ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點
ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點主要包括:
1.操作簡單:該方法只需要一步操作即可完成,操作過程簡單明了,易于掌握。
2.快速:ELISA90分鐘一步法可以在短時間內(nèi)完成,適合于大批量樣品的快速檢測。
3.特異性高:該方法采用特定的抗體或抗原進(jìn)行固定和檢測,因此具有較高的特異性。
4.靈敏度高:ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度,可以檢測出較低濃度的抗原或抗體。
5.重復(fù)性好:該方法的重復(fù)性較好,結(jié)果較為穩(wěn)定。
6.安全性高:ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害物質(zhì),因此具有較高的安全性。
需要注意的是,ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點,例如可能會受到非特異性干擾因素的影響,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。此外,該方法的試劑成本較高,不適合于小規(guī)模樣品的檢測。
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