猴大腦糖原磷酸化酶(PYGB)酶聯(lián)免疫試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

猴大腦糖原磷酸化酶(PYGB)酶聯(lián)免疫試劑盒

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

   標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N"倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N"。 

   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

   生物su標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標(biāo)記抗體加990μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。 

   辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。

操作步驟：

1. 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過(guò)高，可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物su標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 抗原和抗體的儲(chǔ)存：應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫環(huán)境中。同時(shí)要保證試劑盒未過(guò)期，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2. 加樣技術(shù)：加樣時(shí)應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時(shí)應(yīng)在每孔的旁邊放置一個(gè)加樣對(duì)照孔，以監(jiān)測(cè)加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

3. 溫育：溫育是ELISA實(shí)驗(yàn)中的重要步驟，溫育時(shí)間和溫度的控制對(duì)于抗原抗體反應(yīng)的進(jìn)行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。洗滌時(shí)應(yīng)保證每次洗滌時(shí)間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時(shí)要避免在洗滌過(guò)程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

產(chǎn)品包裝：盒裝

性狀：瓶裝液體

規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

保存期限：6個(gè)月

運(yùn)輸條件：2-8℃低溫運(yùn)輸，用干冰或者生物冰袋低溫運(yùn)輸。

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點(diǎn)

ELISA90分鐘一步法的優(yōu)點(diǎn)主要包括：

1.操作簡(jiǎn)單：該方法只需要一步操作即可完成，操作過(guò)程簡(jiǎn)單明了，易于掌握。

2.快速：ELISA90分鐘一步法可以在短時(shí)間內(nèi)完成，適合于大批量樣品的快速檢測(cè)。

3.特異性高：該方法采用特定的抗體或抗原進(jìn)行固定和檢測(cè)，因此具有較高的特異性。

4.靈敏度高：ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度，可以檢測(cè)出較低濃度的抗原或抗體。

5.重復(fù)性好：該方法的重復(fù)性較好，結(jié)果較為穩(wěn)定。

6.安全性高：ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害物質(zhì)，因此具有較高的安全性。

需要注意的是，ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點(diǎn)，例如可能會(huì)受到非特異性干擾因素的影響，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，該方法的試劑成本較高，不適合于小規(guī)模樣品的檢測(cè)。

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