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        1. 上海篤瑪生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第2年

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          豚鼠抗糖蛋白抗體(GP) ELISA 試劑盒

          參   考   價(jià): 1790

          訂  貨  量: ≥1 盒

          具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

          產(chǎn)品型號(hào)96T/48T

          品       牌DUMABIO/篤瑪生物

          廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

          所  在  地上海市

          更新時(shí)間:2024-09-12 08:04:42瀏覽次數(shù):201次

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          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 96T/48T
          貨號(hào) DM-G9895 主要用途 科研實(shí)驗(yàn)
          豚鼠抗糖蛋白抗體(GP) ELISA 試劑盒 :質(zhì)量穩(wěn)定,準(zhǔn)確性高。篤瑪生物全程提供技術(shù)指導(dǎo),確保您實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性還提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。您只需提供代測(cè)樣本,七個(gè)工作日內(nèi)即可為您提供代測(cè)數(shù)據(jù)。歡迎前來咨詢,訂購(gòu)。

          豚鼠抗糖蛋白抗體(GP) ELISA 試劑盒


          獲得idea的兩種途徑:


          1. 自上而下:先閱讀大量科研論文,弄清目前的研究現(xiàn)狀和要解決的問題等;


          2. 自下而上:自己先冥思苦想一段時(shí)間,有了自己的idea后再去查文獻(xiàn)。


          但值得注意的是,別人沒做過的東西,也許不是因?yàn)閯e人沒想到,很可能是因?yàn)闆]有意義或者沒有可能性。



          獲得好idea的基礎(chǔ)前提包括:


          首先在科研前必須彌補(bǔ)基礎(chǔ)知識(shí),這是看懂文獻(xiàn)的基礎(chǔ);其次廣泛閱讀文獻(xiàn);然后學(xué)會(huì)閱讀文獻(xiàn),讀懂文章。


          拿到一篇研究性論文,先看標(biāo)題,立即停住,問自己幾個(gè)問題:


          (1)這文章是怎么做的(可參考材料方法)?會(huì)做哪些內(nèi)容來說明其標(biāo)題?


          (2)為什么要做這個(gè)?


          (3)如文章是近半年內(nèi)發(fā)表的,該文章解決了什么問題?引出了什么問題(結(jié)合你看的綜述)?接下來仔細(xì)看摘要,看你的想法是否與別人吻合?


          (4)看完實(shí)驗(yàn)結(jié)果,再思考有什么地方不完善?有沒有深入或拓展到底?下面還有什么問題可做,關(guān)鍵是你自己要思考,去發(fā)現(xiàn)。長(zhǎng)期作戰(zhàn),持之以恒。



          為何牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如此受寵

          作為各類種屬的高質(zhì)量血清供應(yīng)商,一般客戶咨詢血清購(gòu)買時(shí),我們都會(huì)推薦牛血清。而我公司zui為熱銷的血清產(chǎn)品中莫過于胎牛血清了,那么為何牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如此受寵呢?據(jù)酶聯(lián)生物技術(shù)員分析,主要原因有這五個(gè)方面:

          1. 提供結(jié)合蛋白:作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。

          2. 提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。

          3. 提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生等是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。

          4. 提供激素和各種生長(zhǎng)因子。

          5. 對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

          針對(duì)第五個(gè)原因,我們來重點(diǎn)談?wù)?。有一些?xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止的消化作用。

          我司技術(shù)員分析,這是因?yàn)橐呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了的粘度可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí),粘度起到重要作用。還含有一些微量元素和離子,他們?cè)诖x解毒中起重要作用。

          特別說明到了有多位老師提出問題:人血清一定要加熱滅活嗎?不然會(huì)怎樣?其實(shí)對(duì)于它的加熱滅活是應(yīng)該根據(jù)情況而定的。

          很多朋友在使用實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為一定需要加熱滅活,其實(shí)這個(gè)認(rèn)知是不正確的,是否需要滅活是要根據(jù)情況而定。人們通常通過在56℃加熱30分鐘的辦法,來滅活其中的補(bǔ)體,以及其中可能的微生物(比如支原體)的污染。

          加熱滅活帶來的問題是,其中的氨基酸、維生素和生長(zhǎng)因子等也會(huì)不同程度的被破壞。

          但是它的補(bǔ)體含量很低,即使在未稀釋的胎牛血清中,也觀察不到溶血現(xiàn)象。另外37℃的加熱能夠有效滅活補(bǔ)體。所以對(duì)它而言,并不需要通過專門的熱滅活來滅活其中的補(bǔ)體。

          早期的人血清制備中的濾膜的孔徑大于0.22um,不能有效的去除支原體的污染。熱滅活可以去除支原體的污染。但是現(xiàn)在制備中的終端濾膜的孔徑為0.1um甚至小到0.04um,所以一般沒有支原體的污染。

          通過以上,我們公司總結(jié):除非有特別的情況,標(biāo)準(zhǔn)廠家生產(chǎn)的一般不需要加熱滅活。不過因考慮到其質(zhì)量問題,為安全起見,還是以加熱滅活為好。



          ELISA試劑盒的那點(diǎn)兒事

          酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,又稱酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),即ELISA,是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用的技術(shù)。1971年Engvall等人發(fā)表了使用ELISA定量測(cè)定IgG的文章,將1966年用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。

          ELISA的原理

          ELISA原理是將抗原或抗體包被在固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合,檢測(cè)過程中,通常使用洗板的方式去除非結(jié)合物,最終酶促反應(yīng)后的底物的顏色,對(duì)樣本中蛋白進(jìn)行定性與定量。

          不按說明書操作會(huì)造成的后果

          每一個(gè)試劑盒里都會(huì)有對(duì)應(yīng)的說明書,注意事項(xiàng)里大多都會(huì)提到“實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行"。為什么要嚴(yán)格按照說明書操作?為了更完整的回答這個(gè)問題,需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。

          根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出不同類型的檢測(cè)方法。大致分為以下幾類:

          1.雙抗體夾心法測(cè)抗原

          2.雙抗原夾心法測(cè)抗體

          3.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

          4.間接法測(cè)抗體


          總結(jié)如果不按說明書操作可能會(huì)出現(xiàn)的不滿意結(jié)果。

          A. 先說最嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤,看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說明書,不按操作步驟加樣。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來做,導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色,無任何梯度。


          B. 混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒,所含的試劑成分很可能是不一樣的,混用導(dǎo)致的結(jié)果是,浪費(fèi)珍貴的樣本,樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值,如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物,會(huì)導(dǎo)致顯色過弱或過強(qiáng),因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣。

          C. 不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋,結(jié)果稀釋成1:1000,導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過弱,結(jié)果不可用。

          D. 不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確,孵育溫度不合適,實(shí)驗(yàn)帶來誤差。

          E. 洗滌不充分,每孔洗液加樣過少,或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過快,同時(shí)背景較高。

          F. 手洗板時(shí)所用槍頭沒有懸空加入洗液,導(dǎo)致洗液污染,整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。

          G. 剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋,導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮,下一次再做時(shí),顯色過弱或污染,CV值過高。


            ELISA常見主要試劑

          1. 抗體:單抗特異性強(qiáng),多抗結(jié)合性高,試劑盒需要高效的配對(duì)。

          2. 2.抗原:大多為重組蛋白,細(xì)胞因子和待測(cè)樣本,高效標(biāo)準(zhǔn)品需NIBSC/WHO校準(zhǔn)。

          3. 3.顯色作用體系:首先辣根過氧化物酶(HRP)與常見底物TMB和OPD均可形成顯色體系,再者堿性磷酸酶(AP)的底物為對(duì)-硝基苯磷酸酯可形成黃色底物,還有葡萄糖氧化酶(GOD)的葡萄糖氧化酶法形成特殊顯色,最后β-D-半乳糖苷(β-D-Gal)的底物為4-甲基傘酮基β-D半-乳糖苷(4MUG)可生成高強(qiáng)度熒光。

          ELISA的類型

          根據(jù)試劑的來源和樣本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法,按照原理及操作,市面的方法有:

            1.間接法ELISA

          是檢測(cè)抗體的方法,原理為利用酶標(biāo)記的二抗以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體,顯色測(cè)定。優(yōu)勢(shì)在于待測(cè)一抗無需標(biāo)記快速便捷。直接法ELISA與間接法ELISA相似,區(qū)別在于一抗酶標(biāo),檢測(cè)孵育也以抗原為主,但直接法ELISA的靈敏度有限,需權(quán)衡使用。

          2.夾心法ELISA

          又分為雙抗原夾心法和雙抗體夾心法ELISA,原理相似,用于檢測(cè)抗體或抗原含量。以雙抗體夾心法為例,捕獲抗體包被在固相載體上,加入抗原或待測(cè)樣本結(jié)合,后加入的檢測(cè)抗體結(jié)合在抗原上,形成三明治夾心形式。雙抗夾心法是市面最常見與方便分析的方法。

          3.競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

          小分子抗原與半抗原的檢測(cè)方法常用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA,待檢樣本中抗原越多,被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量會(huì)減少,彼此形成競(jìng)爭(zhēng)負(fù)相關(guān)體系,顯色物質(zhì)也就越少,根據(jù)顯色物質(zhì)的比例可擬合得到待測(cè)抗原含量。

          4.其他方法

          a.免疫抑制法測(cè)ELISA:固相包被抗原,被檢樣本對(duì)底物顯色的抑制程度與樣本中所含抗原的量成正比,二者之差為待測(cè)抗原含量,原理類似與競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

          b.阻斷ELISA:目的檢測(cè)特異性抗體,也稱為競(jìng)爭(zhēng)ELISA,原理為固相包被抗原,待測(cè)樣本與一抗酶標(biāo)競(jìng)爭(zhēng)孵育,待檢樣本中抗體越多,顯色越淺,反則反之。非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒中涉及該法。

          c.此外有用于檢測(cè)IgM抗體的抗體捕捉ELISA,有固相載體改變的Dot-ELISA(硝酸纖維素膜)和C-ELISA(滌綸布),還有技術(shù)分類的TRFIA和多因子檢測(cè)等。

          ELISA的評(píng)估

          ELISA Kit的多指標(biāo)決定了產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣,優(yōu)秀的試劑盒需要對(duì)如下6大項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定評(píng)估,分析如下:

            1、準(zhǔn)確性

          ELISA Kit的多指標(biāo)決定了產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣,優(yōu)秀的試劑盒需要對(duì)如下6大項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定評(píng)估,分析如下:

          a.回收率:測(cè)定試劑盒對(duì)數(shù)據(jù)真實(shí)性的校準(zhǔn),過高或偏低會(huì)產(chǎn)生加樣和假性性的失準(zhǔn)數(shù)據(jù)。

          b.線性:測(cè)定試劑盒稀釋液與樣本微環(huán)境的的準(zhǔn)確性,過高或偏低均會(huì)出現(xiàn)測(cè)定的偏差。

            2、精確度

          a.板內(nèi)精確度:評(píng)價(jià)單次實(shí)驗(yàn)中,同一個(gè)已知濃度不同復(fù)孔的差異。

          b.板間精確度:評(píng)價(jià)同一樣本,多次實(shí)驗(yàn)的差異。

           3、精密度

          檢測(cè)限:能顯著區(qū)分空白信號(hào)的最小信號(hào)值對(duì)應(yīng)的濃度,用于評(píng)估試劑盒的靈敏度,值越低試劑盒靈敏度越高。

            4、特異性

          a.交叉反應(yīng):評(píng)判特異性,不同分子與試劑盒抗體結(jié)合能力,交叉反應(yīng)越大,特異性越差。

          b.抗干擾能力:同源物的干擾,內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的干擾。

            5.天然樣本檢測(cè)性

          對(duì)天然樣本及合適的樣本類型檢測(cè)分析。對(duì)天然樣本類型確定,避免假陽性或假陰性結(jié)果。

            6、穩(wěn)定性

          試劑盒時(shí)效性和穩(wěn)定性是對(duì)指標(biāo)檢測(cè)的重要保障。穩(wěn)定性越高,試劑盒存儲(chǔ)時(shí)間越久。

          ELISA的應(yīng)用

          ELISA技術(shù)是特定靶標(biāo)蛋白質(zhì)定量的金標(biāo)準(zhǔn),提供快速,穩(wěn)定且易于分析的結(jié)果??梢詫?duì)生物大分子/小分子的定量,對(duì)親和力測(cè)定評(píng)價(jià)或者篩選,還可對(duì)重組蛋白或細(xì)胞因子進(jìn)行活性比對(duì)分析等運(yùn)用。常應(yīng)用于細(xì)胞因子,趨化因子,生長(zhǎng)因子等檢測(cè),同時(shí)應(yīng)用于癌癥、干細(xì)胞、免疫學(xué)、神經(jīng)學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等研究領(lǐng)域的靶標(biāo)。

          ELISA實(shí)驗(yàn)所用試劑-酶的底物與最后步驟詳解介紹!

          1,酶的底物

          ·

          HRP的底物

          ·

          HRP催化過氧化物的氧化反應(yīng),代表性的過氧化物為H2O2,其反應(yīng)式如下:DH2+ H2O2 D+ H2O

            上式中,DH2為供氧體,H2O2為受氫體。在ELISA中,DH2一般為無色化合物,經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物,以便作比色測(cè)定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

           OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色,用酸終止酶反應(yīng)后,在492nm處有最高吸收峰,靈敏度高,比色方便,是HRP結(jié)合物的底物。OPD本身難溶于水,OPD·2HCL為水溶性。曾有報(bào)道OPD有致異變性,操作時(shí)應(yīng)予注意。OPD見光易變質(zhì),與過氧化氫混合成底物應(yīng)用液后更不穩(wěn)定,須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中,OPDH2O2一般分成二組分,OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式,片劑中含有發(fā)泡助溶劑,使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中,有制成易保存的濃縮液,使用時(shí)用蒸餾水稀釋。先進(jìn)的ELISA試劑盒中則直接配成含保護(hù)劑的工作濃度為0.02% H2O2的應(yīng)用液,只需加入OPD后即可作為底物應(yīng)用液。

            TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色,目視對(duì)比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn),因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCLH2SO4終止后,TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈黃色,可在比色計(jì)中定量,最適吸收波長(zhǎng)為405nm。

          ABTS雖不如OPDTMB敏感,但空白值極低,也為一些試劑盒所采用。

            另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA],經(jīng)HRP作用后,產(chǎn)物顯熒光,可用熒光光度計(jì)測(cè)量。用于ELISA的優(yōu)點(diǎn)為可加寬定量測(cè)定的線性范圍。

            HRP對(duì)氫受體的專一性很高,僅作用于H2O2、小分醇的過氧化物和尿素過氧化物(urea peroxide)。H2O2應(yīng)用最多,但尿素過氧化物為固體,作為試劑較H2O2方便、穩(wěn)定。試劑盒供應(yīng)尿素過氧化物片劑,用蒸餾水溶解后,在底物緩沖液中密閉、低溫(28℃)可穩(wěn)定1年。





          豚鼠抗糖蛋白抗體(GP) ELISA 試劑盒

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          AP的底物

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            AP為磷酸酯酶,一般采用對(duì)硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作為底物,可制成片劑,使用方便。產(chǎn)物為黃色的對(duì)硝基酚,在405nm波長(zhǎng)處有吸收峰。用NaOH終止酶反應(yīng)后,黃色可穩(wěn)定一時(shí)間。AP也有發(fā)熒光底物(磷酸4-甲基傘酮),可用于ELISA作熒光測(cè)定,敏感度較高于用顯色底物的比色法。

          2,洗滌液

            在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。

          3, 酶反應(yīng)終止液

            常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的最終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。

          4,陽性對(duì)照品和陰性對(duì)照品

            陽性對(duì)照品(positive control)和陰性對(duì)照品(negative control)是檢驗(yàn)試驗(yàn)有效性的控制品,同時(shí)也作為判斷結(jié)果的對(duì)照,因此對(duì)照品,特別是陽性對(duì)照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測(cè)標(biāo)本的組成相一致。以人血清為標(biāo)本的測(cè)定,對(duì)照品最好也為人血清,因?yàn)檎H搜逶诟鞣NELISA模式中可產(chǎn)生不同程度的本底。由于大量正常人血甭較難得到,國(guó)外試劑盒中的對(duì)照品多以復(fù)鈣人血漿(recalcified human plasma)為原料,即在血漿中加入鈣離子,使其中的纖維蛋白質(zhì)凝固,除去凝塊后所得的液體,其組成與血清相似。陰性對(duì)照品須先行檢測(cè),確定其中不含待測(cè)物質(zhì)。

          例如HBsAg檢測(cè)的陰性對(duì)照品中不可含HBsAg,最好抗HBs也是陰性。陽性對(duì)照品多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),其中加入一定量的待檢物質(zhì),此量最好在試劑說明書中標(biāo)明。加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱,在測(cè)定中得到的吸光值與受檢標(biāo)本吸光值比較,可對(duì)標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量有一個(gè)粗略的估計(jì)。國(guó)外檢測(cè)HBsAgELISA試劑盒檢測(cè)敏感度約為0.5ng/ml,陽性對(duì)照品中含量約為10ng/ml。在對(duì)照品中一般加入抗生素和防腐劑,以利保存。

          5,參考標(biāo)準(zhǔn)品

            定量測(cè)定的ELISA試劑盒(例如甲胎蛋白質(zhì)癌胚抗原測(cè)定等)應(yīng)含有制作標(biāo)準(zhǔn)曲線用的參考標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)包括覆蓋可檢測(cè)范圍的4-5個(gè)濃度,一般均配入含蛋白保護(hù)劑及防腐劑的緩沖液中。








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