產(chǎn)品名稱：穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞293E
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號(hào)：C7001） |
細(xì)胞描述 | 本庫的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 | ||
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) | ||
穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞293E到貨后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基）
穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞293E培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請(qǐng)參考我司貨號(hào)：C7001）
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞293E部分相關(guān)細(xì)胞如下：
YS1734HDFSV40T人皮膚成纖維細(xì)胞（國內(nèi)建系處理）HDFSV40T
YS1735 MNNGHOSCl5 人骨肉瘤細(xì)胞MNNGHOSCl5
YS1736 TMK1 人胃腺癌細(xì)胞TMK1
YS1737 HRMVPCSSV40T 人視網(wǎng)膜周細(xì)胞HRMVPCSSV40T
YS1738 HRMECSV40T 人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞HRMECSV40T
YS1739 HMrSV5 人腹膜間皮細(xì)胞HMrSV5
YS1740 HFLSRA 人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞HFLSRA
YS1741 NCIH889 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH889
YS1742 NCIH69 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCIH69
YS1743 SUDHL1 人ALK陽性間變性大細(xì)胞淋巴瘤SUDHL1
YS1744 A427 人肺癌細(xì)胞A427
YS1745 GM12878 人B淋巴細(xì)胞GM12878
YS1746 BPH1 人前列腺增生細(xì)胞BPH1
YS1747 HLEB3 人正常眼睛晶狀體上皮細(xì)胞美國ATCC斷種HLEB3
YS1748 CAL33 人舌鱗癌細(xì)胞CAL33
YS1749 SUDHL16 人ALK陽性間變性大細(xì)胞淋巴瘤SUDHL16
YS1750 mdamb231/GFP/LUC 人乳腺癌細(xì)胞mdamb231/GFP/LUC
YS1751 mdamb468/GFP/LUC 人乳腺癌細(xì)胞mdamb468/GFP/LUC
YS1752 HBL1 人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤HBL1
YS1753 HEK293T懸浮 人胚腎細(xì)胞HEK293T懸浮
YS1754 YT 人NK細(xì)胞白血病細(xì)胞YT
YS1755 94T778 人高分化脂肪肉瘤細(xì)胞94T778
YS1756 SNU5 人胃癌細(xì)胞SNU5
YS1757 GISTT1 人胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞GISTT1
YS1758 Mo7e 人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株Mo7e
YS1759 OCILY10 人B細(xì)胞淋巴瘤OCILY10
YS1760 G402 人B細(xì)胞淋巴瘤G402
YS1761 HPDE6C7 人正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞系HPDE6C7
YS1762 RDES 人尤文氏肉瘤RDES
YS1763 Z138 人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞Z138
YS1764 NCIH747 人盲腸癌細(xì)胞/結(jié)直腸癌NCIH747
YS1765 SNU620 人胃癌細(xì)胞SNU620
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