收到細(xì)胞后,首先要檢查包裝是否完整,確保沒有破損或泄漏。
1:若發(fā)現(xiàn)有破損或漏液情況,及時拍照,并聯(lián)系售后。
用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶表面,放置于顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。
2:發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)異常,及時拍照,并聯(lián)系售后。
確保外包裝無破損或泄露,顯微鏡下觀察細(xì)胞無異常后,細(xì)胞靜置于培養(yǎng)箱中2~4h,穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
將生物安全柜進行酒精消毒和紫外滅菌,為細(xì)胞的復(fù)蘇提供一個無菌的環(huán)境。
仔細(xì)閱讀細(xì)胞附帶的說明書,按照要求準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、因子、胰酶和雙抗等必要物品。
3:不要隨意更改培養(yǎng)條件,以確保細(xì)胞的正常生長。
4:鏡檢并拍照。根據(jù)鏡檢情況,進行下一步處理。
鏡檢時
不同鏡檢結(jié)果
A. 細(xì)胞漂浮。
查閱細(xì)胞說明書,若細(xì)胞為懸浮細(xì)胞、半貼壁細(xì)胞或疏松貼壁細(xì)胞,出現(xiàn)較多細(xì)胞漂浮為正常情況,建議繼續(xù)培養(yǎng),或收集懸浮細(xì)胞,置于新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
若細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,及時拍照,聯(lián)系售后。
B. 細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,且正常貼壁生長,但細(xì)胞密度低于90%。
吸出培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,留5mL左右繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞生長至90%以上后,繼續(xù)傳代培養(yǎng),初次傳代建議1:2傳代。
C. 細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,且正常貼壁生長,密度達(dá)到90%以上。
可直接傳代培養(yǎng),初次傳代建議1:2傳代。
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