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乙醇脫氫酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系統(tǒng)名為乙醇：輔酶I氧化還原酶（alcohol：NAD+ oxidoreductase），

大量存在于人和動(dòng)物肝臟、植物及微生物細(xì)胞之中，是一種含鋅金屬酶，具有廣泛的底物特異性。乙醇脫氫酶夠以煙胺腺嘌呤

二核苷酸(NAD)為輔酶，催化伯醇和醛之間的可逆反應(yīng)： CH3CH2OH+ NAD+→ CH3CHO +NADH+ H+。在人和哺乳動(dòng)物體

內(nèi)，乙醇脫氫酶與乙醛脫氫酶(ALDH)構(gòu)成了乙醇脫氫酶系，參乙醇脫氫酶與體內(nèi)乙醇代謝，是人和動(dòng)物體內(nèi)重要的代謝酶，

作為生物體內(nèi)主要短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶，它在很多生理過(guò)程中起著重要作用；丙酮酸脫羧酶(PDC)、乙醇脫氫酶(ADH)是乙醇發(fā)

酵途徑的關(guān)鍵酶，無(wú)氧呼吸途徑代謝產(chǎn)物的過(guò)程積累對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，影響線粒體結(jié)構(gòu)和三羧酸循環(huán)的相關(guān)酶活性。

乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒(乙醛微板法)檢測(cè)原理是在弱堿條件下，以乙醛為底物，乙醛在ADH催化下被NADH還原

為乙醇，ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH，通過(guò)分光光度比色法(酶標(biāo)儀)測(cè)定340nm處吸光度的變化，計(jì)算出NADH的

消耗速率進(jìn)一步推算出乙醇脫氫酶活性水平，主要用于檢測(cè)植物樣本、血清等中乙醇脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，

不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對(duì)照孔測(cè)定孔

蒸餾水150100

待測(cè)樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測(cè)︰

以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為   A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定

孔的吸光度。

注意事項(xiàng)∶

1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測(cè)，亦可-20°℃保存。

3、如果沒(méi)有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。

4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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