目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>檢測(cè)試劑盒>> TE0720總超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
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貨號(hào) | TE0720 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金屬輔基的酶,能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成過氧化氫
(H2O2)和氧氣(O2),是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶,由于超氧自由基是不穩(wěn)定的的自由基,壽命極短,SOD活性一般用間接
方法測(cè)定,并利用各種呈色反應(yīng)來測(cè)定SOD活力,其中顯色劑有NBT(唑藍(lán)四氮)、WST-1、WST-8等。
總超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒(NBT核黃素微板法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with NBT)是一種基于
NBT的光還原反應(yīng),所以又稱作NBT光還原法,檢測(cè)原理是在有氧化物質(zhì)存在下核黃素被光還原,在有氧條件下,被還原的核黃
素極易再氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基(O2.-),O2.-可將氮藍(lán)四唑還原為藍(lán)色的甲腙,后者在560nm處有強(qiáng)吸收,而SOD可清除
超氧陰離子(O2.-),從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應(yīng)后,反應(yīng)液藍(lán)色愈深,說明SOD活性愈低,反之酶活性愈高,
據(jù)此通過酶標(biāo)儀比色分析就可以計(jì)算出樣品中總超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用SOD抑制NBT在光照下的還原作用來
確定酶活性大小,可用于檢測(cè)植物、組織、細(xì)胞、血清或其它樣品中SOD活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,
不適用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
自備材料:
1、蒸餾水
2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管
3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板
操作步驟(僅供參考):
1、準(zhǔn)備樣品∶
①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000r/min
離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨解氨酶的檢測(cè)。
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定,-20℃凍存,用于苯丙解氨的檢測(cè)。
③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000r/min離心15~20min,取上清液,
-20℃凍存,用于苯丙酸解氨酶的檢測(cè)。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL
Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、PAL加樣∶
取96孔板,按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并
注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔,
求平均值。
加入物(μl)對(duì)照孔測(cè)定孔
蒸餾水150100
待測(cè)樣本5050
PAL Assay Buffer-50
3、PAL檢測(cè)︰
以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零),酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為 A測(cè)定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,立即加入10μl PAL終止
液終止反應(yīng)(備選方案),以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定孔的吸光度(記為A測(cè)定1)。
注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測(cè)定290nm處測(cè)定
孔的吸光度。
注意事項(xiàng)∶
1、待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑,同時(shí)需避免反復(fù)凍融。
2、獲得上清液為PAL酶液,應(yīng)盡快檢測(cè),亦可-20°℃保存。
3、如果沒有可測(cè)定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿,但應(yīng)注意比色杯的最小檢測(cè)體積。
4、每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過多,否則操作時(shí)間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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52719P52719pCMV-EGFP-STUB1(human)-3×FLAG-Neo
52720P52720pPGK-Fluc-DIABLO(AQhuman)-3UTR-hRluc-Neo
52721P52721pHAGE-CMV-3×HA-EEA1(human)-Hyg
52722P52722pCMV-CEP19(human)-EGFP-Neo
52723P52723pCMV-NPC1L1(human)-mCherry-Neo
52724P52724pmini35S-Rluc-CmR
52725P52725pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro
52726P52726pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA2-CopGFP-Puro
52727P52727pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
52728P52728pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA3-CopGFP-Puro
52729P52729pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
52730P52730pLV3-U6-PGM5-AS1(human)-lncRNA-shRNA2-CopGFP-Puro
52731P52731pLV3-U6-SLC1A3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
52732P52732pLV3-U6-DUOXA1(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52733P52733pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52734P52734pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA1-CopGFP-Puro
52735P52735pLV3-U6-BUD23(human)-shRNA2-CopGFP-Puro
52736P52736pLV3-U6-CCNE1(human)-shRNA4-Puro
52737P52737pLV3-U6-KMT2D(human)-sgRNA4-Cas9-EGFP-Puro
52738P52738pLV3-U6-Fndc5(mouse)-sgRNA1-Cas9-EGFP-Puro
52739P52739pLV3-U6-FDX1(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52740P52740pLV3-U6-PODXL2(human)-shRNA3-CopGFP-Puro
52741P52741pCMV-NLRP14(human)-3×FLAG-Neo
52742P52742pCMV-CHAT(human)-3×FLAG-Puro
52743P52743pLV3-U6-JAK2(human)-sgRNA1-sgRNA2-Cas9-EGFP
52744P52744pCMV-GLDN(human)-P2A-mCherry-Neo
52745P52745pLV2-CMV-TRIM41(human)-Myc-Puro
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