目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> D30039N 2.0 DNA連接酶試劑
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更新時(shí)間:2024-11-01 15:53:30瀏覽次數(shù):141評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 4000U |
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貨號(hào) | D3003 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
9N 2.0 DNA連接酶試劑(又名9oN DNA Ligase)能夠催化磷酸二酯鍵的形成,使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5′-磷酸末端和3′-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。該酶來(lái)源于極度耐熱的海底超嗜熱古菌(Thermococcus sp.)9°N 菌株中克隆的連接酶基因,在 45℃-70℃ 范圍內(nèi)均有活性。該酶進(jìn)一步經(jīng)基因工程基因突變,使得耐受更高的溫度,在95℃孵育5min后活性幾乎無(wú)損失,因此其適用于:
(1)高溫條件下,連接DNA鏈上的切刻位點(diǎn)
(2)適用LCR反應(yīng)(Ligase Chain Reaction)
(3)適用MLPA反應(yīng)(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)
活性定義
1單位指 20μl反應(yīng)體系中,50℃條件下,15分鐘內(nèi)能使50%的1pmol的接頭片段(12 bp 粘性末端)發(fā)生連接所需要的酶量。
儲(chǔ)存
-20℃可保存兩年。
9N 2.0 DNA連接酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示
應(yīng)用實(shí)例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果,可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。
應(yīng)用實(shí)例2: 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,在反應(yīng)結(jié)束后,倒置反應(yīng)管,溶解管蓋上染料后,陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,陰性表現(xiàn)出橙色,區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。
應(yīng)用實(shí)例3:A3825-01 紅黃變色反應(yīng)(肉眼觀察)
以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起
始前,下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。
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