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更新時(shí)間:2024-11-02 11:50:35瀏覽次數(shù):135評(píng)價(jià)
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分子式 | 免費(fèi)代測(cè) | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 48T/96T | 貨號(hào) | YS10220B |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,綜合 | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
產(chǎn)品名稱:植物脂氧合酶4(LOX-4)ELISA試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中指標(biāo)水平。用純化的指標(biāo)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入指標(biāo),再與HRP標(biāo)記的-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò) 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中指標(biāo)濃度。
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
植物脂氧合酶4(LOX-4)ELISA試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù),為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過(guò)程質(zhì)量控制,在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃
注意事項(xiàng)
1、每個(gè)樣本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類,如果要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8°C,若不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)進(jìn)行分裝,凍存于-20°或-80°C,避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本。
4、血清標(biāo)本采集是應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解是會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測(cè)的準(zhǔn)確性,必須正確收集尿液標(biāo)本和保存,收集尿液的容器必須要清潔干燥, 使用一次性的容器,避免因用藥并清潔不到而造成的污染,尿液樣本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時(shí)檢測(cè)或保存
6、標(biāo)本宜在新鮮是檢測(cè)如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久,其中可能發(fā)生聚合,間接法ELISA中樂(lè)視本底加深,
7、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以待測(cè)樣本如需多次檢測(cè),宜少量分裝凍存
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月更多產(chǎn)品詳情聯(lián)系我們
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