目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>試劑盒>>ELISA試劑盒>> YS10086B植物蛋白酶6(caspase-6)ELISA試劑盒
分子式 | 免費代測 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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規(guī)格 | 48T/96T | 貨號 | YS10086B |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,綜合 | 主要用途 | 科研實驗 |
產(chǎn)品名稱:植物蛋白酶6(caspase-6)ELISA試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中指標水平。用純化的指標抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入指標,再與HRP標記的-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中指標濃度。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
植物蛋白酶6(caspase-6)ELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據(jù),為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性,在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制,在收集標本前都必須有一個完整的計劃
注意事項
1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類,如果要做復(fù)孔,標本量收集體積=100ulx檢測種類x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進行檢測可保存于2-8°C,若不及時檢測,請進行分裝,凍存于-20°或-80°C,避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍,建議實驗前通過相關(guān)文獻預(yù)估樣本中待測物的濃度并通過預(yù)實驗確定樣本。
4、血清標本采集是應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解是會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),溶血標本可能會增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測的準確性,必須正確收集尿液標本和保存,收集尿液的容器必須要清潔干燥, 使用一次性的容器,避免因用藥并清潔不到而造成的污染,尿液樣本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時檢測或保存
6、標本宜在新鮮是檢測如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中可能發(fā)生聚合,間接法ELISA中樂視本底加深,
7、反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,所以待測樣本如需多次檢測,宜少量分裝凍存
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月更多產(chǎn)品詳情聯(lián)系我們
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