AAT Bioquest   22789  活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*

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AAT Bioquest 活細(xì)胞死細(xì)胞活力檢測試劑盒-常備現(xiàn)貨

美國 AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AATBioquest 的產(chǎn)品幫助 quan shi jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest 會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  22789  活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：22789

產(chǎn)品名稱：活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*

產(chǎn)品規(guī)格：200 Tests

AAT Bioquest 活細(xì)胞死細(xì)胞活力檢測試劑盒-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  22789  活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests，產(chǎn)品說明：

這種活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力使用兩種熒光指示劑：用于活細(xì)胞的鈣黃綠素AM和用于膜受損細(xì)胞的細(xì)胞不可滲透的DNA結(jié)合染料。鈣黃綠素AM是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細(xì)胞中，并在酯酶水解時變成強(qiáng)烈的熒光。非熒光鈣黃綠素AM通過細(xì)胞內(nèi)酯酶水解產(chǎn)生強(qiáng)熒光親水性鈣黃綠素，該鈣黃綠素很好地保留在細(xì)胞質(zhì)中。酯酶活性與小瓶細(xì)胞的數(shù)量成正比。DNA結(jié)合染料具有很強(qiáng)的極性，對于具有完整膜的活細(xì)胞來說是不滲透的。它只有在與死細(xì)胞的DNA結(jié)合時才會發(fā)出熒光。在黑壁平板中生長的細(xì)胞可以在不到兩小時的時間內(nèi)進(jìn)行染色和定量。該測定比其他活性測定更穩(wěn)健、更準(zhǔn)確。它可以很容易地適應(yīng)各種熒光平臺中的高通量測定，例如微孔板測定、免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。該試劑盒通過優(yōu)化的檢測方案提供所有基本組件。它適用于增殖和非增殖細(xì)胞，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。該試劑盒以 100 孔格式每孔使用 96 ul 試劑，可提供足夠的試劑進(jìn)行 100 次檢測。該試劑盒以 25 孔形式每孔使用 384 ul 試劑，可提供足夠的試劑進(jìn)行 400 次檢測。

組件

組分A：細(xì)胞鈣黃綠™  2 瓶，凍干

組分B：碘化丙啶  1 瓶（10 mM，40 μL）

組件C：DMSO     1 瓶 （100 μL）

組分D：檢測緩沖液    1 瓶 （20 mL）

1.    用測試化合物制備細(xì)胞

2.    加入相同體積的細(xì)胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液（100 μL/孔/ 96孔板或25 μL/孔/ 384孔板）

3.    在室溫或 37°C 下孵育 1 小時

4.    監(jiān)測強(qiáng)度（底部讀數(shù)模式）Ex/Em = 490/525 nm（截止值 = 515 nm，活體）和 540/620 nm（截止值 = 590 nm，死）的熒光，帶FITC濾光片（活）和TRITC濾光片（死）的熒光顯微鏡，或帶FL1和FL2通道的流式細(xì)胞儀

重要注意事項：在開始實驗之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。

儲備液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1.細(xì)胞鈣黃綠™儲備溶液：

將20 μL DMSO（組分C）加入細(xì)胞鈣黃綠（組分A）小瓶中，充分混合制成細(xì)胞鈣黃綠™™儲備溶液。避光。注意：20 μL 細(xì)胞鈣黃綠™儲備溶液足以用于一個板。儲存時，請密封管子。

工作溶液的制備

將全部內(nèi)容量 （20 μL） 的細(xì)胞鈣黃綠儲備溶液和 20 μL 碘化丙啶（組分 B）加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 C）中，充分混合制成細(xì)胞鈣黃綠™™/碘化丙啶染料工作溶液。細(xì)胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定保存至少 2 小時。注意：如果CHO細(xì)胞等細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，導(dǎo)致熒光染料隨時間推移泄漏，則應(yīng)制備丙磺shu儲備溶液，并以最終孔內(nèi)工作濃度范圍為1至2.5 mM添加到上樣緩沖液中。未使用的丙磺shu儲備溶液可儲存在 ≤ -20oC.由于最佳染色條件可能因不同的細(xì)胞類型而異，因此建議分別確定組分A和B的適當(dāng)濃度。

實驗方案樣本

使用酶標(biāo)儀或熒光顯微鏡運行細(xì)胞活力測定：

1.    根據(jù)需要用測試化合物處理細(xì)胞。注意：在添加化合物之前不需要清洗細(xì)胞。但是，如果測試化合物對血清敏感，則可以在添加化合物之前吸走生長培養(yǎng)基和血清因子。抽吸后加入 100 μL/孔/96 孔板和 25 μL/孔/384 孔板的 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液 （HHBS） 或您選擇的緩沖液?；蛘撸?xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中生長。

2.    加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）細(xì)胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液。

3.    將板在室溫或 37°C 下孵育 30 分鐘至 1 小時，避光。（孵育時間可以從15分鐘到過夜。我們在孵育時間少于4小時的情況下獲得了最佳結(jié)果）。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。上樣后不要清洗細(xì)胞。對于非貼壁細(xì)胞，建議在孵育后以800rpm離心細(xì)胞板2分鐘，制動器關(guān)閉。

4.    使用熒光板讀數(shù)器（底部讀取模式）在Ex / Em = 490 / 525 nm（截止= 515 nm，活體）和Ex / Em = 540 / 620 nm（截止= 590 nm，死）或熒光顯微鏡與FITC濾光片監(jiān)測熒光強(qiáng)度活細(xì)胞或TRITC濾光片用于死細(xì)胞。

使用流式細(xì)胞儀運行細(xì)胞活力測定：

1.    用測試化合物處理細(xì)胞所需的時間。

2.    離心細(xì)胞得到 1 - 5 × 10⁵細(xì)胞/管。

3.    將細(xì)胞重懸于500μL細(xì)胞鈣黃綠™/碘化丙啶染料工作溶液中。

4.    在室溫或 37°C 下孵育 10 至 30 分鐘，避光。

5.    自選：用您選擇的HHBS或緩沖液洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于 500 μL HHBS 中，得到 1 - 5 × 105每管細(xì)胞數(shù)。

6.    使用流式細(xì)胞儀在Ex / Em = 490/525 nm和Ex / Em = 490/620 nm（FL1和FL2通道）處監(jiān)測熒光強(qiáng)度。

產(chǎn)品訂購信息：

22789  活細(xì)胞或死™細(xì)胞活力檢測試劑盒 *綠色/紅色雙熒光*  200 Tests