首頁(yè) >> 公司動(dòng)態(tài) >> 雙三元聯(lián)用在線SPE，賽默飛助力“國(guó)家生物監(jiān)測(cè)”
大家先看幾個(gè)耳熟能詳?shù)臄?shù)據(jù)：
每年有約400萬中國(guó)人死于吸煙引發(fā)疾病，超過因艾滋病、結(jié)核、交通事故及死亡的人數(shù)總和；
平均每6秒就有一個(gè)人死于吸煙有關(guān)疾?。?/span>
吸煙者的平均壽命要比不吸煙者縮短10年；
*每年因吸煙死亡人數(shù)高達(dá)700萬，其中89萬為常年吸食二手煙導(dǎo)致。
1究竟是什么讓吸煙如此有害健康？
吸煙者多死于肺癌，煙氣中常見的有害物苯并芘是一種高活性間接致癌物，屬于多環(huán)芳烴的一種。多環(huán)芳烴（簡(jiǎn)稱PAHs）是人類早發(fā)現(xiàn)的一類環(huán)境有機(jī)致癌化合物，廣泛存在于煙熏燒烤類食品、香煙煙霧中，通過呼吸道、消化道和皮膚進(jìn)入人體，參與體內(nèi)代謝，生成羥基多環(huán)芳烴（OH-PAHs）。香煙煙霧作為多環(huán)芳烴的一個(gè)重要來源，是吸煙者（包括吸二手煙者）接觸多環(huán)芳烴的主要途徑。
圖1 非吸煙者（左）與吸煙者（右）肺部對(duì)比圖
2如何檢測(cè)人體內(nèi)的多環(huán)芳烴（PAHs）？
目前，尿液中的OH-PAHs是研究多的人體對(duì)PAHs 的暴露水平綜合評(píng)價(jià)的生物標(biāo)志物。但是尿液中多環(huán)芳烴代謝物的含量極低，且尿液成分較復(fù)雜，所含雜質(zhì)可能對(duì)色譜柱造成損害，直接進(jìn)樣不能滿足分析要求。而現(xiàn)有采用離線固相萃取技術(shù)來減少基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)靈敏度的方法，操作過程繁瑣費(fèi)時(shí)，重現(xiàn)性較差，成本較高。
在線固相萃?。∣nline-SPE）是近年發(fā)展起來的一種全自動(dòng)樣品前處理方式，具有富集純化一步完成、固相萃取柱可多次使用、重現(xiàn)性好、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，已被應(yīng)用于食品、環(huán)境、生物等樣品中痕量有機(jī)物的檢測(cè)。
賽默飛與“國(guó)家生物監(jiān)測(cè)”重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室之一的上海疾病預(yù)防控制中心合作，開發(fā)了基于賽默飛雙三元液相色譜—在線SPE大體積進(jìn)樣方法，實(shí)現(xiàn)人體尿液中多環(huán)芳烴羥基代謝產(chǎn)物的高靈敏度監(jiān)測(cè)。
“國(guó)家人體生物監(jiān)測(cè)項(xiàng)目”是國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委疾控局組織的國(guó)家重大公共衛(wèi)生服務(wù)項(xiàng)目，通過在全國(guó)開展現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查和人體生物樣本中環(huán)境化合物檢測(cè)，獲得全國(guó)有代表性的環(huán)境化合物在人體內(nèi)暴露負(fù)荷的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為今后相關(guān)公共衛(wèi)生工作提供技術(shù)支持。
本方法采用基于快速渦流色譜的Turboflow Cyclone 固相萃取柱對(duì)目標(biāo)尿樣進(jìn)行在線富集純化，將大分子蛋白雜質(zhì)提前分離去除，不僅延長(zhǎng)了固相萃取柱使用壽命，而且進(jìn)一步降低了交叉污染率。同時(shí)，采用UHPLC-MS法，利用PAHs 細(xì)粒徑UHPLC色譜柱對(duì)多環(huán)芳烴代謝物實(shí)現(xiàn)快速分離，解決了常規(guī)液相分離中部分目標(biāo)物的出峰無法*分開和無法準(zhǔn)確定性定量的問題，結(jié)合大體積進(jìn)樣，大大提高了檢測(cè)靈敏度。
圖2 在線SPE大體積進(jìn)樣系統(tǒng)工作原理圖
【進(jìn)樣富集】
【轉(zhuǎn)移】
【分析過程】
實(shí)驗(yàn)條件
富集柱：Turboflow Cyclone柱（50×0.5 mm）；
分析柱：PAH UHPLC柱（2.1x100 mm，1.8 μm）；
柱溫30℃；進(jìn)樣量2500 μL；
流動(dòng)相A：水，B：甲醇:乙腈（1:1）；
梯度洗脫程序表1；質(zhì)譜條件：負(fù)離子電噴霧（ESI-）。
表1 梯度洗脫程序
表2 多環(huán)芳烴羥基代謝物的保留時(shí)間、檢測(cè)離子對(duì)和碰撞電壓
注：帶“*”為定量離子對(duì)。
檢測(cè)結(jié)果
通過使用Turboflow Cyclone富集柱和1.8 μm UHPLC細(xì)徑分析柱（2.1x100 mm），12種目標(biāo)化合物能夠在短時(shí)間內(nèi)快速分離，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖見圖3。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示方法線性范圍廣（0.002~1.0 μg/L），線性較好，且回收率高（90%~110%），各目標(biāo)物在尿液中的檢出限低可達(dá)到0.001 μg/L水平，各目標(biāo)物的6次進(jìn)樣結(jié)果RSD不超過5%，重復(fù)性較好。實(shí)驗(yàn)采集了24個(gè)尿液樣本（9名兒童和15名成人，包括6名吸煙成人男性）進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果顯示，吸煙者尿液中各種多環(huán)芳烴代謝物檢出量顯著高于非吸煙者（見表2）。
圖3 各多環(huán)芳烴羥基代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖
表3 吸煙和非吸煙者尿液樣品中部分多環(huán)芳烴羥基代謝物測(cè)定結(jié)果
結(jié)論
本方法采用雙三元在線固相萃取前處理方法，大大簡(jiǎn)化了樣品前處理過程，分析成本大為降低，樣品經(jīng)固相萃取柱富集濃縮后在線轉(zhuǎn)移至分析柱進(jìn)行分析，樣品中的待測(cè)組分能全部轉(zhuǎn)移至分析柱，樣品用量少且無損耗，采用質(zhì)譜檢測(cè)器可獲得較高的靈敏度，可實(shí)現(xiàn)大批量樣品的自動(dòng)、快速、檢測(cè)。
感謝上海疾病預(yù)防控制中心各位老師的辛勤工作，老師們用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)再一次告訴我們：為健康，為家人，為自己，請(qǐng)拒絕吸煙！
關(guān)鍵詞：雙三元液相色譜；在線固相萃?。欢喹h(huán)芳烴羥基代謝物；LC-MS
注：以上數(shù)據(jù)由上海疾病預(yù)防控制中心化學(xué)品毒性檢定所提供
我的成功離不開你講故事-贏大禮
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