史俊霞
凝膠過濾色譜法是體積排阻色譜法的一種，以水或者緩沖液為流動相；以有機溶劑為流動相的一般叫凝膠滲透色譜法。
兩者都屬于體積排阻色譜法（Size exclusion chromatography，SEC）。SEC是20世紀60年代發(fā)展的一種分離模式。它是根據空間結構不同的分子在多孔顆粒中的路徑不同而進行分離。原理如下
01
原理
看完原理給我們就有了一個小的tips啦:
tips 1
分子直徑比最大孔隙直徑大的分子全部被排阻在凝膠顆粒以外，兩種或兩種以上的這樣的分子不能達到分離效果。
tips 2
分子直徑比最小孔隙直徑小的分子能全部進入凝膠顆粒內部，這樣的兩種或兩種以上的分子也不能達到分離效果。
02
應用領域
•單抗
•雙抗
•ADC
•融合蛋白
•血液制品
•重組白蛋白
•PEG蛋白
•多肽
輔料和殘留分析
•吐溫80/20
•聚乙二醇
•泊洛沙姆
•聚乙烯吡咯烷酮
食品化藥領域
•水溶性抗生素聚體分析
•乳品中乳白蛋白和乳球蛋白分離
•中藥中吐溫20/80
不同的樣品由于空間結構不同，在同一根柱子上的排阻范圍不同。參考選用跟標準品結構最相近的排阻范圍內的柱子。如下BIOBASIC系列SEC色譜柱的不同標準品的校準曲線如下：
生物藥質控
•單抗
•雙抗
•ADC
•融合蛋白
•血液制品
•重組白蛋白
•糖蛋白
•PEG蛋白
•多肽
•多糖
•纖維素
生物藥工藝監(jiān)控
03
方法開發(fā)考慮因素
1、孔徑分布
300Å vs 250Å
相近孔徑分布的柱子，在檢測同一個樣品時，聚體與主峰或者主峰與片段的分離可能會存在比較大的差異。
2、粒徑
(該數(shù)據來自于2020藥典四部)
5 μm vs 10 μm
不同的粒徑的相近孔徑分布的柱子，分析需要的柱長和分析時間會有差異。
3、緩沖體系
CX-1 Buffer vs 磷酸鹽緩沖液
緩沖體系中流動相的組成，pH值可能會改變蛋白的三維結構和折疊狀態(tài)，進而影響單體，片段與聚體的分離。
4、鹽濃度
由于包裹技術的差異，樣品可能會跟色譜柱之間存在一些離子性吸附，這個時候，需要提高流動相中鹽的濃度來屏蔽這種作用。Mabpac SEC 系列優(yōu)異的包裹技術，可以在比較低的鹽濃度下分析蛋白樣品，進而用于Native 質譜方法開發(fā)。
僅僅給出方法開發(fā)tips怎么能表達我們的誠意呢，我們更推出了免費SEC做樣的服務，快快掃描以下二維碼或點擊閱讀原文報名參加吧：
// 相關鏈接：
”
助力中國制“藥”彎道超車、揚帆出海，ADC藥物的全面表征 (一)
//點擊閱讀
BIOBASIC SEC-120，只為更精細的抗生素分析
//點擊閱讀
// 參考資料：
”
[1] 2020藥典
[2]Technical Guide Biobasic SEC Columns
[3]Complete characterization of a lysine-linked antibody drug conjugate by native LC/MS intact mass analysis and peptide mapping
+ + + + +
如需合作轉載本文，請文末留言。
點擊閱讀原文也能報名哦~
16
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務