原創(chuàng) 飛飛 賽默飛色譜與質(zhì)譜中國
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劉興國 鄭喆
2022年11月USP更新了重酒石酸膽堿等相關(guān)品種含量及有關(guān)物質(zhì)測定方法，于今年6月1日實施，方法采用了電霧式檢測器（CAD）進行測定，這是又一個采用電霧式檢測的品種收入USP。我國新頒布的國家標(biāo)準(zhǔn)GB5413.20-2022也對膽堿的測定方法進行了提升，采用酶比色法、離子色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定膽堿含量。這些方法的實施，改善了膽堿結(jié)構(gòu)中缺少發(fā)色團，以往采用紫外檢測器進行檢測，干擾大靈敏度低的不足。
膽堿是卵磷脂的組成成分，也存在于神經(jīng)鞘磷脂之中，是機體可變甲基的一個來源而作用于合成甲基的產(chǎn)物,同時又是乙酰膽堿的前體。是大腦健康、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和肝功能正常運作，都離不開的一種重要營養(yǎng)素。
本文分別采用Z-Hilic和Trinity P1兩種交換機理的色譜柱，結(jié)合電霧式檢測器（CAD）對多維元素片中重酒石酸膽堿含量進行測定。電霧式檢測器是一種高靈敏度、通用性強的檢測器，可作為紫外檢測器的良好補充，對弱紫外吸收化合物有非常好的響應(yīng)。
圖1 多維元素片
儀器配置
Thermo Fisher Vanquish高效液相色譜儀，
基座:Vanquish System Base，
泵：Vanquish Core Quaternary Pump（VC-P21-A），
自動進樣器：Split Sampler CT（VC-A13-A），
柱溫箱：Vanquish Column Compartment C（VC-C10-A），
檢測器：Charged Aerosol Detector H，
色譜軟件：變色龍Chromeleon 7.3。
圖2 配置CAD檢測器的Vanquish液相色譜儀
Trinity P1色譜柱方法
色譜柱：Trinity P1(150 mm×3.0 mm，3μm)，
流動相：溶液A為20mM乙酸銨（PH5.2），溶液B為乙腈，A：B =（80：20）作為流動相；
流速0.6mL/min，進樣體積10 µL，柱溫30 °C；
檢測器采集頻率10Hz，過濾常數(shù)5s，蒸發(fā)溫度35℃。
對照品溶液和供試品溶液分別進樣分析，測定結(jié)果見圖3-4。
圖3 對照品溶液測定譜圖
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圖4 供試品溶液測定譜圖
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Z-hilic色譜柱方法
色譜柱：Z-HILIC (150 mm×4.6 mm，5μm)，
流動相：配制6.2g/L的醋酸銨水溶液，再用冰醋酸調(diào)節(jié)至pH值為4.7作為緩沖液，溶液A為緩沖液和乙腈（20：80），溶液B為緩沖液、水和乙腈（20：30：50），流動相梯度見表1；
流速0.5mL/min，進樣體積10 µL，柱溫30 °C；
檢測器采集頻率10Hz，過濾常數(shù)5s，蒸發(fā)溫度35℃。
表1 流動相梯度
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對照品溶液和供試品溶液分別進樣分析，測定結(jié)果見圖5-6。
圖5 對照品溶液測定譜圖
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圖6 供試品溶液測定譜圖
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測定結(jié)果
取某品牌多維元素片（標(biāo)示膽堿含量25.00mg/片）2片，進行樣品制備和測定，結(jié)果見表2。兩種方法測定結(jié)果進行比對，結(jié)果基本一致，偏差小于1.5%。
表2 樣品測定結(jié)果
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總結(jié)
對比兩種方法，在樣品中其他組分干擾少的情況下，Trinity P1色譜柱方法測定時間短，基線噪音低，可以做到更低的檢出限；Z-Hilic色譜柱方法膽堿保留強，更適用于復(fù)雜組分樣品的分析?，F(xiàn)代化的儀器方法提高了檢測的準(zhǔn)確度，保證了廣大民眾使用藥品保健品的安全。
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