黄色视频不卡_午夜福利免费观看在线_亚洲国产精品999在线_欧美绝顶高潮抽搐喷水_久久精品成人免费网站_晚上一个人看的免费电影_国产又色又爽无遮挡免费看_成人国产av品久久久

    1. <dd id="lgp98"></dd>
      • <dd id="lgp98"></dd>
        1. 上海乾思生物科技有限公司
          中級會員 | 第16年

          18916423352

          細胞庫
          優(yōu)勢品牌
          Encapsula NanoSciences Quidel Bioporto Salimetrics Research Products International Corp Quanta BioDesign Peninsula Laboratories International Golden West Diagnostics Ocean NanoTech HaemoScan affinitybiologicals Cytodiagnostics Innovagen AB CLIAwaived Svar Abbexa ABMgood AffinityImmuno AGScientific AHF analysentechnik AG Alomone 英國Antibodies AstaTech Avidity Badrilla BioAcademia Biomatik Biosynth BioTeZ Biotrend Calbiotech CaroteNature Cell Sciences Click Chemistry Tools Cohesion Biosciences CordenPharma Cosmo Bio Creative Biomart Crystal Chem Crystalgen Diagnovum DiaMetra Dianova Diatheva Eagle Manufacturing Echelon Biosciences Edgebio Emfret Epoch Life Science Equitech-Bio Eramask Euro Diagnostica Exocell Fine Science Tools GenwayBio Giotto Biotech Glen Research Glycosynth Gold Biotechnology Golden West Biologicals Haemtech(HTI) Herolab IHC WORLD ImmuChrom GmbH Immunostep Immunotools Immunovision INCELL Corporation Innovative Research Innovrsrch(IRA) Insitus Iris Biotech GmbH Isosep IST Engineering Inc J.G. Finneran Kainos Kamiya Biomedical Labor Diagnostika Nord Larodan Laysanbio Lc laboratories Lee BioSolutions LGC Biosearch Technologies Lifecore List Labs lumiprobe Macrocyclics Medix Biochemica Meridian Life Science Microbix Milenia Biotec Moscerdam Mybiosource Nanoimmunotech Nanoprobes Neuro Probe Paratechs Physitemp Polypure Polysciences Probetex Progen ProScience Inc ProSpec QAbio Qorpak Quanta BioSciences QuickZyme RevMAb Biosciences SCHMIDT BioMedTech Seven Hills Foundation Smartox Biotechnology Spherotech Surgimax Swant SYSY Ted Pella Torpac Trilink USBio VIDIA Ltd ViroStat Virusys VP-scientific Xcessbio XENOMETRIX Zeptometrix ZYTOVISION
          自產ELISA試劑盒,試劑盒
          進口ELISA試劑盒
          人細胞,人細胞系,人細胞株
          3h biomedical,3H Biomedical AB,3hbiomedical,3-M Company,4adi,4rtilab,5 prime,5prime a & g pharmaceuticals,A&D Weighing,Aalto Scientific,Aalto Scientific ltd,Aalto Scientific,ltd.,aaltobioreagents,aaltoscientific,aat bioquest AAT Bioquest Inc,AB Biolabs,ab peptides,AB Sciex,Abaxis,Abazyme,Abberior,abbexa abbiotec,Abbkine,abbomax,Abbott Molecular,abcam,ABclonal,ABclonal Inc.,abcore-inc abcr GmbH,abcrGmbH,abcysonline,ABD,ABD Bioquest,Inc,abd serotec,ab-direct,abdserotec Abeomics,abfrontier,abgab,abgene,abgent,ABI Applied Biosystems,abiocode,abionline Abkem Iberia,ABL,Inc,Abliance,abm Inc.,abmart,abmgood,Abmole,Abmole Bioscience Inc. abnova,Abraxis,Absolute Antibody,ABT Beads,abt beads technologies,ABTbeads,abvision,Abways abzoom,academy biomed,academy bio-medical,acanthus research,acanthusresearch,ACC,accelagen,Accelagen inc. Access Biologicals,LLC,accessbiologicals,acciusa,accu-chek,AccuDiag Allergy,AccuDiag Anemia,AccuDiag Autoimmune Diseases,AccuDiag Bone Metabolism AccuDiag Thyroid,accumax accutase,Accumetrics,Accurate,accurate chemical,Accurate Wirecraft Company,accuratechemical,accustandard acdbio,Ace Glass,Ace Hose and Rubber Co,ACEA Biosciences,ACL Incorporated,ACME Microspheres Inc,ACMEmicrospheres,acris acris antibodies,Acris Antibodies GmbH,acris-antibodies,ACROBiosystems,acrometrix,acros,Acros Organics,ACT Test Panels LLC actc,actgene,active motif,activemotif,Adam Equipment,Inc,AddexBio,Addexbio Technologies,addgene ademtech,adg,ADI,ADInstruments,adipogen,Adolf Kuhner,adooq,Advance Tabco advanced immunochemical,advanced immunochemical inc,advanced targeting systems,Advansta,Advansta Inc.,Advansta,Inc,Advantech,Advent Electric Inc adventbio,advnt,advtechind,advy chemical,advy chemical Purified Proteins,advychemical Polyclonal Antisera,aesku,aetltd affiland,affinity,affinity biologicals,affinity bioreagent,Affinity BioReagents,Affinity BioReagents abr,Affinity Biosciences,affinitybiologicals AffinityBioReagents,AffinityImmuno,affix scientific,affixscientific,affymetrix,ag scientific,Agar Scientific,agarscientific agdia,Agela Technologies,agilent,Agilent Seahorse,agilent technologies,agilet,agilet solutions,agiletsolutions agrenvec,agrisera,AGRO-BIO,agscientific,ahdiagnostics,ahf,AHF analysentechnik,AHF analysentechnik AG Air Technology Solutions,Airgas Safety,Air-Tite,AJAX SCIENTIFIC LTD,AK Limited,Akro-Mils,ALA Scientfic,alamarblue Alba Bioscience,Alconox Inc,aldevron,alerchek,alere,Alexis,ALEXIS Biochemicals,Alfa Aesar Aline Biosciences,AlineBiosciences,All Foils Incorporated,Allcells,allele biotech,allelebiotech,allen-bradley,AllerMAbs
          大鼠細胞,大鼠細胞系
          細胞株,細胞系,傳代細胞
          抗體庫,小包裝,流式抗體
          SIGMA現(xiàn)貨,SIGMA代理

          活細胞表面受體二聚化/寡聚化分析

          時間:2010/12/2閱讀:3216
          分享:

          摘要: 目前有兩個不同的方向進行受體二聚化/寡聚化檢測,一個是體外檢測,一個是活細胞檢測。CO-IP是應用zui廣泛的檢測二聚化/寡聚化的體外方法?;罴毎麢z測的方法主要基于能量共振轉移原理,包括FRET、pbFRET 、BRET、HTRF(TR-FRET)等。Tag-lite將SNAP-Tag、HaloTag和HTRF技術結合起來,可以非常方便可靠地檢測活細胞受體二聚化/寡聚化。

          G蛋白偶聯(lián)受體很久以來一直被認為是以單體的形式存在,并且與配體結合進行信號轉導的。然而,近年來,越來越多的實驗證據表明,有的GPCR可形成同源二聚體或異源二聚體而發(fā)揮作用。雖然這種聚集在與G蛋白結合方面的作用還存在爭議,但是許多GPCR確實可形成二聚體/寡聚體是毋庸置疑的,尤其是C類受體(class C receptor)。二聚體/寡聚體除了可能參與G蛋白結合,還可能在GPCR脫敏、GPCR合成后從內質網分泌到細胞表面等過程中發(fā)揮作用。

           

           

          二聚化/寡聚化的發(fā)現(xiàn)給新藥研發(fā)提供了新的思路,尤其是對于異源聚集。在這種模式下,藥物可能與一個GPCR結合,并共同活化了第二個GPCR,引起細胞反應。如果我們只用其中一個GPCR去做篩選,很可能看不到有意義的結果。同時,受體聚集的提出,給孤兒受體(orphan GPCR)也提出了新的解釋?;蛟S,這些孤兒受體可與其它GPCR形成二聚體/寡聚體,作為parter,而不是以單體的形式發(fā)揮作用。

          有兩個不同的方向進行受體二聚化/寡聚化檢測,一個是體外檢測,一個是活細胞檢測。CO-IP是應用zui廣泛的檢測二聚化/寡聚化的體外方法?;罴毎麢z測的方法主要基于能量共振轉移(RET)原理,包括FRET、pbFRET 、BRET、HTRF(TR-FRET)等。Tag-lite將SNAP-Tag、HaloTag和HTRF技術結合起來,可以非常方便可靠地檢測活細胞受體二聚化/寡聚化。

          檢測原理

          同源二聚體的檢測
          構建SNAP和GPCR的共表達載體,轉染入細胞,可表達SNAP-GPCR的融合蛋白。然后,加入分別標記了Tb和Acceptor熒光染料的底物,則部分GPCR標記了Tb(Tb-GPCR),部分標記了Acceptor熒光染料(Acceotor-GPCR)。如果GPCR可以形成同源二聚體,配體刺激后,兩個GPCR會相互靠近并偶聯(lián)。Tb-GPCR與Acceptor-GPCR之間發(fā)生能量共振轉移,檢測到HTRF信號,見圖1。

          圖1:GPCR同源二聚體檢測模式

          異源二聚體的檢測
          分別構建SNAP-GPCR1和CLIP-GPCR2的表達載體,共轉染,可得到表達SNAP-GPCR1和CLIP-GPCR2的細胞。加入標記了Tb的SNAP底物和標記了Acceptor熒光染料的CLIP底物,細胞表面的受體為Tb-SNAP-GPCR1和Acceptor-CLIP-GPCR2。如果GPCR形成異源二聚體,配體刺激后,GPCR1/2相互靠近發(fā)揮作用。Tb與Acceptor之間發(fā)生能量共振轉移,檢測到HTRF信號,見圖2。

          圖2:GPCR異源二聚體檢測模式

          HaloTag與SNAP相似,也是一個自身標記的酶,通過與標記了熒光的底物反應,將自身標記上熒光。在這個實驗中,我們也可以構建HaloTag與GPCR的表達載體。

          檢測特點和優(yōu)勢
          • 活細胞水平的檢測
          • 檢測背景低:時間分辨熒光的檢測方式,沒有熒光染料自身的交叉干擾和來自樣品自發(fā)熒光的干擾
          • 實驗結果可靠:FRET技術使檢測結果反映的是真正的受體聚集,而不是僅僅相互靠近
          • 不需要抗體:Tag-lite利用的SNAP技術,不需要抗體來確定實驗的特異性

          應用領域
          • 受體二聚化/寡聚化分析
          • 孤兒受體的研究

          應用實例

          C類GPCR:GPCRGABAB1與GABAB2的異源二聚化檢測
          分別構建GABAB1與SNAP-Tag和GABAB2與HaloTag的表達載體,共轉染細胞。蛋白表達后,固定SNAP的底物BG-Tb濃度不變,配制不同濃度的HaloTag的底物Halo-Red濃度,將兩種底物混合后加入細胞。孵育1h后,檢測HTRF信號,實驗結果如圖3所示。

          GABAB1與GABAB2形成異源二聚體發(fā)揮作用。隨著Halo-Red濃度的加大,有更多的能量從Tb轉移到Red染料上,HTRF信號增強,直到達到平衡。

           

          圖3:GABAB1與GABAB2的異源二聚化檢測

          A類GPCR:多巴胺D2與Delta 阿片的異源二聚化檢測
          分別構建Delta阿片與SNAP-Tag和多巴胺與HaloTag的表達載體,共轉染細胞。蛋白表達后,固定SNAP的底物BG-Tb濃度不變,配制不同濃度的HaloTag的底物Halo-Red濃度,將兩種底物混合后加入細胞。孵育1h后,檢測HTRF信號,實驗結果如圖4所示。

            

          圖4:GABAB1與GABAB2的異源二聚化檢測

          多巴胺D2與Delta阿片形成異源二聚體發(fā)揮作用。隨著Halo-Red濃度的加大,有更多的能量從Tb轉移到Red染料上,HTRF信號增強,直到達到平衡。

          乾思生物elisa試劑盒網發(fā)布

          會員登錄

          ×

          請輸入賬號

          請輸入密碼

          =請輸驗證碼

          收藏該商鋪

          X
          該信息已收藏!
          標簽:
          保存成功

          (空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

          常用:

          提示

          X
          您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
          撥打電話
          在線留言
          柳河县| 宝鸡市| 寻甸| 靖安县| 怀安县| 海伦市| 玉山县| 罗江县| 陇西县| 潼关县| 微山县| 霍城县| 邯郸县| 家居| 饶阳县| 舒城县| 库尔勒市| 泽普县| 南城县| 密云县| 许昌市| 清原| 缙云县| 淮南市| 凌云县| 佛坪县| 新竹市| 平原县| 阿克陶县| 秀山| 奈曼旗| 团风县| 陈巴尔虎旗| 长葛市| 商南县| 介休市| 鄯善县| 泗水县| 原平市| 泰来县| 安庆市|