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        1. 上海乾思生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第16年

          18916423352

          細(xì)胞庫
          優(yōu)勢品牌
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          自產(chǎn)ELISA試劑盒,試劑盒
          進(jìn)口ELISA試劑盒
          人細(xì)胞,人細(xì)胞系,人細(xì)胞株
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          大鼠細(xì)胞,大鼠細(xì)胞系
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          抗體庫,小包裝,流式抗體
          SIGMA現(xiàn)貨,SIGMA代理

          人Laminin-5/Epiligrin ELISA試劑盒說明書

          時(shí)間:2011/11/24閱讀:585
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          乾思生物編輯整理:
          本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷人(Human)Laminin-5/Epiligrin ELISA試劑盒使用說明書
          檢測原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被Laminin-5/Epiligrin抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Laminin-5/Epiligrin呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
          樣品收集、處理及保存方法:
          1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
          3.細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
          4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
          5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
          自備物品:
          1.酶標(biāo)儀(450nm)
          2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
          3.37℃恒溫箱
          操作注意事項(xiàng):
          1.試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
          2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
          3.濃度為0 的S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白;按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍,zui終結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度。
          4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
          5.所有液體組分使用前充分搖勻。
          試劑盒組成;
          名稱96孔配置48孔配置備注;
          微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無;
          標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無;
          樣本稀釋液6mL 3mL 無;
          檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無;
          20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋;
          底物A 6mL 3mL 無;
          底物B 6mL 3mL 無;
          終止液6mL 3mL 無;
          封板膜2 張2 張無;
          說明書1 份1 份無;
          自封袋1 個(gè)1 個(gè)無;
          注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、0.5、1、2、4、8 ng/mL.
          試劑的準(zhǔn)備:20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。
          洗板方法:
          1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。
          2.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。
          操作步驟:
          1.從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
          2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
          3.樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
          4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
          5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。
          6.每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm 波長處測定各孔的OD值。
          結(jié)果判斷:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
          試劑盒性能:;
          1.準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,大于等于0.9900。
          2.靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
          3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
          4.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
          5.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
          6.有效期:6 個(gè)月。

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