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        1. 上海乾思生物科技有限公司
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          人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)Elisa試劑盒

          時間:2011/11/30閱讀:618
          分享:
          人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)Elisa試劑盒說明書
          人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)Elisa試劑盒僅供研究使用。
          檢測范圍:96T     1.5 ng/ml - 48 ng/ml
          使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量。
          實驗原理:人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)水平。用純化的人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入環(huán)磷酸鳥苷(cGMP),再與HRP 標(biāo)記的環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)濃度。
          組成:
          1.30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶7 終止液 6ml×1瓶;
          2.酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(96 ng/ml)0.5ml×1瓶;
          3.酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶;
          4.樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10  說明書1份;
          5.顯色劑A液 6ml×1 瓶 11 封板膜2張;
          6.顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋1個;
          標(biāo)本要求:
          1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
          馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
          2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          操作步驟:
          1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
          48 ng/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
          24 ng/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
          12 ng/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
          6 ng/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
          3 ng/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
          2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
          3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
          4.配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
          5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
          7.溫育:操作同3。
          8.洗滌:操作同5。
          9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15分鐘。
          10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
          11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行。
          操作程序總結(jié):
          計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
          注意事項:
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請避光保存。
          7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號組分不得混用。
          10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
          保存條件及有效期:
          1.試劑盒保存:2-8℃。
          2.有效期:6個月。

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