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        1. 上海乾思生物科技有限公司
          中級會員 | 第16年

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          細(xì)胞庫
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          自產(chǎn)ELISA試劑盒,試劑盒
          進(jìn)口ELISA試劑盒
          人細(xì)胞,人細(xì)胞系,人細(xì)胞株
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          人乳頭瘤病毒18(HPV-18)ELISA試劑盒

          時間:2011/11/30閱讀:591
          分享:
          人乳頭瘤病毒18(HPV-18)ELISA試劑盒說明書
          人乳頭瘤病毒18(HPV-18)ELISA試劑盒僅供研究使用
          檢測原理:人乳頭瘤病毒18(HPV-18)ELISA試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人乳頭瘤病毒18(HPV-18)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、
          HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人乳頭瘤病毒18(HPV-18)的存在與否。
          樣品收集、處理及保存方法:
          1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
          2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
          3.細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
          4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
          5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
          自備物品:
          1.酶標(biāo)儀(450nm)
          2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
          3.37℃恒溫箱
          操作注意事項(xiàng):
          1.試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
          2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。3. 預(yù)處理后的樣請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到
          的的*檢測效果。
          4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
          5.所有液體組分使用前充分搖勻。
          組成:
          名稱96孔配置48孔配置備注
          微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
          陰性對照0.5mL 0.5mL 無
          陽性對照0.5mL 0.5mL 無
          檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
          20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
          樣本稀釋液6mL 3mL 無
          底物A 6mL 3mL 無
          底物B 6mL 3mL 無
          終止液6mL 3mL 無
          封板膜2 張2 張無
          說明書1 份1 份無
          自封袋1 個1 個無
          試劑的準(zhǔn)備:20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩
          沖液加19份的蒸餾水。
          洗板方法:
          1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
          2.自動洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
          操作步驟:
          1.從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
          2.設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;
          3.待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
          4.隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
          5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。
          6.每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。
          7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
          結(jié)果判斷:
          1.試驗(yàn)有效性:陽性對照孔OD 值平均值≥1.00;陰性對照孔OD 值平均值≤0.15。
          2.臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
          3.陰性判斷:樣品OD 值<臨界值(Cut off),樣品為陰性
          4.陽性判斷:樣品OD 值>臨界值(Cut off),樣品為陽性
          試劑盒性能:
          1.準(zhǔn)確性:陽性對照孔OD 值平均值≥1.00;陰性對照孔OD 值平均值≤0.15,說明試驗(yàn)結(jié)果有效。
          2.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
          3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
          4.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
          5.有效期:6 個月

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