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當前位置:上海乾思生物科技有限公司>>大鼠細胞,大鼠細胞系>> 細胞Mouse C-Peptide ELISA Kit
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號細胞
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)代理商
所 在 地上海市
更新時間:2023-05-10 11:04:58瀏覽次數(shù):613次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)IL-21 Interleukin-21 ELISA KIT
供貨周期 | 一個月 | 應用領域 | 化工 |
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Q3.細胞計數(shù)及存活測試
1、原理:
(1)計算細胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù)。
(2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細胞數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),再乘以104,即為每ml中之細胞數(shù)目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率:活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%。計數(shù)應在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數(shù)更為準確。
Q4.細胞特性
在細胞培養(yǎng)之前,我們要了解一下你所要養(yǎng)細胞的基本特性,這點可以從細胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數(shù)量,建議分裂或傳代的比例,和已知細胞的傳代代次等信息。
Q5.準備培養(yǎng)基
復蘇細胞時需要準備合適的培養(yǎng)基,血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)體系,可以在訂購細胞系時獲得。
雖然大多數(shù)細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長,但是當培養(yǎng)基改變時,細胞的性質(zhì)也會變化。因此,使用細胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞會獲得的效果。
Q6.開啟凍存管
1.準備一個培養(yǎng)瓶,加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH(CO2)?!?br/>2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞。將這些細胞懸液轉移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。
Q7. 培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響
由于,大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。
但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養(yǎng)用液時,可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
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