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        1. 上海乾思生物科技有限公司
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          當前位置:上海乾思生物科技有限公司>>大鼠細胞,大鼠細胞系>> 細胞Mouse C-Peptide ELISA Kit

          Mouse C-Peptide ELISA Kit

          參  考  價面議
          具體成交價以合同協(xié)議為準

          產(chǎn)品型號細胞

          品       牌其他品牌

          廠商性質(zhì)代理商

          所  在  地上海市

          更新時間:2023-05-10 11:04:58瀏覽次數(shù):613次

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          供貨周期 一個月 應用領域 化工
          英文品名:Mouse C-Peptide ELISA Kit
          貨號:90050
          廠商品牌:Crystalchem
          實驗準備:
          1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

          英文品名:Mouse C-Peptide ELISA Kit
          貨號:90050
          廠商品牌:Crystalchem
          實驗準備:
          1.  試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
          2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
          3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
          4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
          5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
          6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
          7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
             建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。

            Q3.細胞計數(shù)及存活測試
          1、原理:
          (1)計算細胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù)。
          (2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細胞數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),再乘以104,即為每ml中之細胞數(shù)目。
          (3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率:活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%。計數(shù)應在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數(shù)更為準確。

            Q4.細胞特性
          在細胞培養(yǎng)之前,我們要了解一下你所要養(yǎng)細胞的基本特性,這點可以從細胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數(shù)量,建議分裂或傳代的比例,和已知細胞的傳代代次等信息。

            Q5.準備培養(yǎng)基
          復蘇細胞時需要準備合適的培養(yǎng)基,血清和細胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)體系,可以在訂購細胞系時獲得。
          雖然大多數(shù)細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長,但是當培養(yǎng)基改變時,細胞的性質(zhì)也會變化。因此,使用細胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞會獲得的效果。

            Q6.開啟凍存管
          1.準備一個培養(yǎng)瓶,加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH(CO2)?!?br/>2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,約2分鐘或直到冰晶融化即可。
          3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
          4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞。將這些細胞懸液轉移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
          5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。

            Q7. 培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

            由于,大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。

            但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養(yǎng)用液時,可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。


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