TPO-Ab ELISA

TPO-Ab ELISA樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。檢測對象:人血清/血漿及相關(guān)液體實(shí)驗(yàn)方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒，GBD試劑盒，IBL試劑盒

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
 3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
 4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

常用生化試劑作用：

1、蛋白酶K：能水解消化蛋白質(zhì)，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白，在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。

2、SDS：十二烷基硫酸鈉，溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì)，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，并解離細(xì)胞中的核蛋白，SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。

3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合，

使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結(jié)合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。

4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的顯色試劑，在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選。

5、G418：一種抗生素，對幾乎所有的細(xì)胞都有毒性，是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方

6、DMSO：二甲基亞砜。實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑，同時(shí)用作測試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴。

7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40。

8、NP-40：很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液。

10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑，也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA。

注意事項(xiàng)：

1、去正規(guī)耗材經(jīng)銷處。

2、注意耗材的防偽標(biāo)志?，F(xiàn)在各大廠商的耗材都增加了不同的防偽標(biāo)志。如果貼有防偽標(biāo)準(zhǔn)，注意是正好貼在封口處，如果拆封了的話標(biāo)志也會碎了。

一、常見elisa試劑盒

1、細(xì)胞因子檢測試劑盒：

如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長因子，趨化因子，細(xì)胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等

2、肝纖維化檢測elisa試劑盒：

如纖維連接蛋白，透明質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等等

3、心肌梗塞檢測elisa試劑盒：

如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應(yīng)蛋白等等

4、內(nèi)分泌檢測elisa試劑盒：

如免疫球蛋白,抗鏈O-aso,類風(fēng)濕因子RF,C反應(yīng)蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉(zhuǎn)鐵蛋白transferrin等等