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耗材專區(qū) | 應(yīng)用EZsep™ HMR-Lipid固相萃取柱檢測魚肉中水楊酸殘留量

閱讀：364 發(fā)布時(shí)間：2024-10-18
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前言

水楊酸，分子式為C₇H₆O₃，是植物柳樹皮提取物，是一種天然的消炎藥。水楊酸可以殺菌、消炎，從而常被用于對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物體表的水霉、鰓霉的剝離分解及傷口修復(fù)，水產(chǎn)動(dòng)物因紅斑、皮膚病、打印、赤皮、爛尾、潰爛、腐皮、膚霉、脫粘、白頭白嘴、爛鰓、水腫、出血等引起的多種傷口能快速愈合。本品定期使用能有效預(yù)防和降低水產(chǎn)品發(fā)病率并快速凈化水體，從而抑制降解水體中的各種雜菌及病原體，但長期過量使用會(huì)造成藥物在動(dòng)物體內(nèi)富集，人類食用這些水產(chǎn)品會(huì)使殘留的獸藥進(jìn)入人體，從而影響人體健康。
本文參照《魚可食性組織中水楊酸殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見稿)》，利用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300mg/6mL，貨號(hào)：PZ12624） 凈化樣品，再通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測進(jìn)行檢測，建立了魚肉中水楊酸殘留量的分析方法。

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實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器與試劑
MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置，貨號(hào)：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；
EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300 mg/6mL，貨號(hào)：PZ12624），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；
冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；
乙腈（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；
甲酸（分析純），購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 工作液配制
水楊酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：100mg/瓶，購自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。
水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品適量(相當(dāng)于有效成分約10mg)，精密稱定，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1000μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：濃度為100μg/mL溶劑為甲醇，購自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。
水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液。
水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：水楊酸標(biāo)準(zhǔn)中間液1.0mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液。
水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液:移取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL，用乙腈稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1.0μg/mL的水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液。
依次移取1.0μg/mL的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0mL，分別置于10mL容量瓶中并均加入水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)使用液0.2mL，以0.1%甲酸水溶液定容至刻度，得到濃度依次為0μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，水楊酸D4濃度固定為20μg/L。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分
1.3.1 樣品制備
取魚肉試樣2g，置于50mL聚丙烯離心管中，添加水楊酸D4標(biāo)準(zhǔn)工作液40μL，加5%甲酸乙腈溶液10.0mL，渦旋混勻1min超聲提取10min，10000r/min冷凍離心5min，收集上清液5.0mL待凈化
1.3.2 固相萃取凈化
EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300 mg/6mL，貨號(hào)：PZ12624）用5mL乙腈進(jìn)行活化，取1.3.1待凈化液上樣，收集流出液，以E.T.氮吹濃縮儀，40℃氮?dú)鉂饪s至近干，加1.0mL0.1%甲酸水溶液，渦旋混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
1.3.1 LC-MS/MS儀器條件
色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；
流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水溶液；B：乙腈；
流速：0.3mL/min。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

2
實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 加標(biāo)回收率
圖1 標(biāo)液色譜圖
圖2 空白樣品色譜圖
圖3 10μg/kg樣品添加色譜圖

3
實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300mg/6mL，貨號(hào)：PZ12624） 對(duì)魚肉樣品進(jìn)行凈化，通過高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定其中的水楊酸殘留量，該方法的加標(biāo)回收率在95.0%~105.3%之間，RSD為3.8%，滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。測試結(jié)果說明EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱（300 mg/6mL，貨號(hào)：PZ12624）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。
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參考文獻(xiàn)

[1] 《魚可食性組織中水楊酸殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見稿)》

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