如何看懂質粒圖譜和質粒上各個元件具體作用是什么。

看載體圖譜大部分可以根據(jù)以下幾步來理解：

*步：首先看Ori的位置，了解載體的類型（原核/真核/穿梭載體）Ori的箭頭指復制方向，其他元件標注的箭頭多指轉錄方向（正向）。

所謂穿梭載體是指一類人工構建的具有兩種不同復制起點和選擇標記，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復制的質粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達載體的構建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2 和用于植物細胞的Ti 質粒。這些穿梭載體不僅可以在大腸桿菌中復制擴增，也可以在相應的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利于對質粒的分子生物學操作和大量制備。

第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。

（1）Ampr 水解β－內酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。
（2）tetr 可以阻止四環(huán)素進入細胞。
（3）camr 生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸轉移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位點（MCS）。
它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。
一般來說，外源DNA的片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉化效率越低。

第五步：是否含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號。這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用哪種載體，還是要以實驗目的為準。
要把一個有用的目的基因通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體。載體有克隆載體，看懂質粒圖譜是將目的基因裝入載體前必須要做的功課，只有看懂質粒圖譜才知道如何將目的基因裝入載體及所要用的載體的大致用途。

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