抗熒光衰退封片劑CITIFLUOR™ -（Antifadent Mountant Solutions）

一系列特意為免疫熒光反應(yīng)封片設(shè)計(jì)的產(chǎn)品，*的配方使得染料的熒光不再衰退。常用的抗熒光衰退封片劑有AF1、AF2、AF3、AF4、AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1、CFM-2等等。其中部分產(chǎn)品含DAPI,可襯染細(xì)胞核或襯染DNA的實(shí)驗(yàn)。

關(guān)于抗熒光淬滅劑，常見(jiàn)的三種：酚型的沒(méi)食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的對(duì)苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octane（DABCO）三乙烯二胺。熒光淬滅的基本理論是這樣滴：組織切片中的普通溶解氧在激發(fā)態(tài)時(shí)變成了單線(xiàn)態(tài)氧，單線(xiàn)態(tài)氧類(lèi)似氧自由基，這個(gè)東西就是熒光淬滅的主要元兇，我們加入的抗淬滅劑主要是與這個(gè)元兇反應(yīng)，直接清除單線(xiàn)態(tài)氧。注意，封片劑中加入抗淬滅劑，往往在激發(fā)的初級(jí)階段使熒光總量降低，還有與DNA結(jié)合染料反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)?？纯催@三種試劑的優(yōu)缺點(diǎn)吧：PPD可以與花菁染料反應(yīng)（尤其Cy2），故這類(lèi)染料封片考慮不用含PPD的封片劑；NPG，無(wú)毒，活細(xì)胞熒光染色這類(lèi)封片劑，但是NPG對(duì)細(xì)胞凋亡的過(guò)程有所干涉，進(jìn)行此類(lèi)研究的同學(xué)多注意啦，盡量避開(kāi)含有NPG的封片劑；DABCO不像PPD那樣有效且毒性低，可以用于活細(xì)胞，但是與NPG一樣，對(duì)細(xì)胞凋亡的過(guò)程有所干涉。

大量的封片劑堆砌在這里，怎樣快速的找到自己需要的那個(gè)呢？簡(jiǎn)單的思路是：

*步，凝固型還是非凝固型？凝固起來(lái)貯存和拿取很方便，要考慮的是凝固過(guò)程中組織片的收縮以及需要脫水步驟的收縮。非凝固型需要考慮的是封片劑的揮發(fā)和側(cè)漏，當(dāng)然需要蓋玻片啦（有時(shí)還需要硅膠密封墊spacer），而且往往蓋玻片還需要密封起來(lái)，常用指甲油、牙科蠟、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在蓋玻片周?chē)恳幌?，指甲油干固所需時(shí)間較長(zhǎng)，有污染鏡頭的風(fēng)險(xiǎn)；牙科蠟在常溫拿下能較快固化；VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活細(xì)胞封固中很常用。

第二步：需要甘油基（水溶性）的還是非甘油基（脂溶性）的？甘油可以與任何比例的水混溶，可以與乙醇相溶，但不與油混溶。知道這些，選擇起來(lái)就簡(jiǎn)單多了。你的組化反應(yīng)體系是怎樣的？含水，就選甘油基（水溶性的）的。經(jīng)過(guò)嚴(yán)格脫水處理，就選非甘油基的（油溶性的）。

第三步、封片劑的折射率。染色的片子用封片劑選擇折射率在1．52至1．54之間透明度*；未染色組織用有很高或很低折光率的封片劑封固，這樣的封片劑可以消除球面相差，獲得*的圖像。

介紹用到的成膜劑：

聚乙烯醇poly (vinyl alcohol)：有機(jī)高分子物質(zhì)，無(wú)毒，可溶于水，常用的一種成膜劑。根據(jù)其聚合度和醇解度的不同編為不同的號(hào)碼，例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物質(zhì)或者反應(yīng)進(jìn)行改性處理， 例如Permafix-1就是改性的PVA。

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)簡(jiǎn)稱(chēng)PVP，是一種非離子型高分子化合物，也是常用的成膜劑。

產(chǎn)品選購(gòu)指南：

l AF1:基本成分是甘油、PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑、其它成分等，折射率1.46，PH10左右，適于用于檢測(cè)浸泡在甘油中的組織切片、死細(xì)胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。

l AF2:基本成分是甘油、抗熒光淬滅劑、其它成分等，沒(méi)有自身的緩沖液。折射率1.47，該產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)在沒(méi)有自身緩沖液，可以與任意其它緩沖液相容。

l AF3:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑、其它成分，折射率1.34，對(duì)于活細(xì)胞檢測(cè)特別適用。

l AFR3: 基本成分是PBS緩沖液、一種型的抗熒光淬滅劑（非胺非酚型）、其他成分等。

l AF4:又稱(chēng)Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片劑，添加的抗熒光衰退劑是沒(méi)食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。

l AF87：特別的地方是含有無(wú)熒光浸油，這是為在高倍鏡下觀(guān)察特別設(shè)計(jì)的封片劑，對(duì)于DAPI染色特別有用（DAPI 在甘油基封片劑中有疏散的傾向）。

l AF100:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光衰退劑、其他成分等，這是一款不含甘油的封片劑，需要與CFPVOH溶液配套使用。需要預(yù)先混合AF100和CFPVOH溶液，用多少混合多少，混合后10小時(shí)內(nèi)用完。該封片劑的折射率1.34-1.35.

l AF200:與AF100類(lèi)同，不同的是，AF200是甘油基的,胺基型抗熒光衰退劑，適于花青素、Alexa、Hoeches等封片。

l AF300:與AF100類(lèi)同，不同的是，AF300是甘油基的，酚基型抗熒光衰退劑。

l CFM系列的封片劑的折射率均是1.52，等于或者近似等于所用載片和蓋片玻璃的折射率，這對(duì)圖像的獲得很有幫助。主要于激光共聚焦顯微鏡下使用，或者高倍鏡需要浸油的情況下來(lái)替代浸油。CFM-1的pH約6.5，.CFM-1 Plus Antifadent的PH值大約10， CFM-2的pH of約~8.5，CFM-3的PH值接近中性。

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