液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測,從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。
液相色譜法有“四高一廣”的特點:
①高壓:流動相為液體,流經(jīng)色譜柱時,受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對載液加高壓。
②高速:分析速度快、載液流速快,較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成,一般小于1小時。
③:分離效能高。可選擇固定相和流動相以達(dá)到*分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
④高靈敏度:紫外檢測器可達(dá)0.01ng,進(jìn)樣量在μL數(shù)量級。
⑤應(yīng)用范圍廣:百分之七十以上的有機化合物可用液相色譜分析,特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢。
⑥柱子可反復(fù)使用:用一根柱子可分離不同化合物
⑦樣品量少、容易回收:樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
此外液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
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