蛋白marker可分為未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染。那么,什么是預(yù)染蛋白marker?預(yù)染蛋白marker為一些純化好的蛋白的混合物.這些蛋白混合物與一種藍(lán)色染料共價偶聯(lián).可在凝膠電泳時出現(xiàn)強(qiáng)度均勻的8條帶.同未預(yù)染的蛋白marker相比,預(yù)染蛋白marker因與染料共價偶聯(lián)而在SDS-PAGE電泳時的遷移特性發(fā)生某些改變.
預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn):預(yù)染蛋白分子量是一些純化好的蛋白混合物,通過與染料共價耦聯(lián),在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實(shí)驗(yàn),這種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率 比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預(yù)染蛋白Marker就可以預(yù)測目標(biāo)蛋白進(jìn)入*分辨區(qū)時停止電泳以得到*分辨效果,如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳,另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,還可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量,所以吸引了許多實(shí)驗(yàn)室人員購買預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián),所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,可能導(dǎo)致一些偏差,所以不太適合定位蛋白 不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標(biāo)蛋白*一樣,我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,zui后都需要Western來定性,所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶,預(yù)染Marker還是很好用的,而且也可以和未染色的蛋白標(biāo)準(zhǔn)一起使用。
預(yù)染蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以分為兩種:單色預(yù)染和多色預(yù)染,其實(shí)區(qū)別就在于幫助在實(shí)驗(yàn)過程中辨認(rèn)某個條帶的大小—Marker條帶越多參考價值越大,可就越難辨認(rèn)區(qū)分,如果用不同的顏色來區(qū)別就比較好辨認(rèn)。單色的Marker通常是利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小的。還有一點(diǎn)特別要注意,由于轉(zhuǎn)膜是一個將膠里的Marker濃縮在潔白的膜上,所以需要的上樣量相對少一些,如果想要在電泳過程中看到美麗的“彩虹”,或者單色的Marker往往需要比說明書里多加一些Marker的。
非和有什么區(qū)別
非電泳時看不到條帶,染色后才能看到,而會有特定的某些蛋白條帶帶有顏色,電泳過程中可以觀察到,還有在WB過程中也起到轉(zhuǎn)膜是否成功的指示作用。
預(yù)染的marker的分子量在不同濃度膠上跑出來是不一樣的,這個叫表觀分子量。未預(yù)染的marker是zui準(zhǔn)確的,如果只做wb,預(yù)染的marker就夠了,每次都能觀察轉(zhuǎn)膜情況。
其他都是些細(xì)節(jié)上的區(qū)別,比如有些會做成彩虹色的,以便區(qū)別分子量大小有些的條帶比較多等等。
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