作為微孔板比色計(jì)的酶標(biāo)儀，其底子功用不外乎一個(gè)比色測(cè)定，所紛歧樣的是在測(cè)定波長(zhǎng)規(guī)模、吸光度規(guī)模、光學(xué)體系、檢測(cè)速度、震板功用、溫度操控、定性和定量測(cè)定軟件功用等方面的差異，當(dāng)然全主動(dòng)酶免疫剖析體系還具有主動(dòng)洗板、溫育、加樣等功用。
 

　　在臨床試驗(yàn)室實(shí)踐作業(yè)中，試驗(yàn)人員在運(yùn)用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定操作時(shí)，有時(shí)不免會(huì)對(duì)酶標(biāo)儀的一些功能指標(biāo)發(fā)作利誘，甚至對(duì)酶標(biāo)儀的運(yùn)用發(fā)作過錯(cuò)的知道。如比如運(yùn)用酶標(biāo)儀較用肉眼調(diào)查測(cè)定的陽性率顯著增加這樣的疑問。
 

　　1、測(cè)定波長(zhǎng)：通常酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)在400～750nm或800nm之間，*可以滿意ELISA的顯色測(cè)定。當(dāng)前國(guó)內(nèi)常見的ELISA試劑盒所運(yùn)用的符號(hào)用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存鄙人，經(jīng)HRP作用，別離氧化為2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波利益有zui大吸收，當(dāng)pH值降為L(zhǎng) 0時(shí)，zui大吸收波長(zhǎng)移至492 nm，一起摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸停止反響。TMB的氧化產(chǎn)品聯(lián)苯醌在波長(zhǎng)450nm處有zui大消光系數(shù)，若是HRP量少，H：O：和TMB過量時(shí)，則構(gòu)成藍(lán)色的陽離子根。下降pH，即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，運(yùn)用硫酸作為停止劑可使產(chǎn)品安穩(wěn)90min。因而，450nm和492 nm兩個(gè)波長(zhǎng)是當(dāng)前ELISA測(cè)定zui常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可主動(dòng)變換的部件，可以一起裝置6～8片濾光片，所裝備的濾光片均應(yīng)包含上述兩個(gè)波長(zhǎng)，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個(gè)底子濾光片外，考慮到雙波長(zhǎng)比色的需求，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長(zhǎng)的濾光片，其他濾光片可依據(jù)自個(gè)的需求挑選。有時(shí)，有的試驗(yàn)室期望用酶標(biāo)儀作微量生化測(cè)定，故酶標(biāo)儀出產(chǎn)廠家對(duì)其出產(chǎn)的酶標(biāo)儀拓展了紫外檢測(cè)功用，此刻需求一個(gè)340 nm波長(zhǎng)濾光片。此刻，酶標(biāo)儀的測(cè)定波長(zhǎng)規(guī)模就變成340—750nm或800nm。
 

　　酶標(biāo)儀有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)檢測(cè)功用有時(shí)運(yùn)用者不知在啥情況下運(yùn)用單或雙波長(zhǎng)檢測(cè)。所謂的“單波長(zhǎng)”即是運(yùn)用一種對(duì)顯色具zui大吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定;而“雙波長(zhǎng)”則除了用對(duì)顯色具zui大吸收的波長(zhǎng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測(cè)定外，一起用對(duì)特異顯色不靈敏的波長(zhǎng)如630 nm進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)儀zui終打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長(zhǎng)下得到的吸光度對(duì)錯(cuò)特異的，來自于板孑L上比如指紋、塵埃、臟物等所形成的的吸收。因而，在ELISA比色測(cè)定中，*運(yùn)用雙波長(zhǎng)，且不用設(shè)空白孔。
 

　　2、測(cè)定的吸光度規(guī)模：通常，酶標(biāo)儀的吸光度測(cè)定規(guī)模在。一2.5之間即可以滿意ELISA的測(cè)定需求。前期的酶標(biāo)儀可測(cè)定的吸光度通常在。一2.5之間，但現(xiàn)在底子上都做了拓展，可到達(dá)3.5以上，并且能堅(jiān)持精細(xì)度與線性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK—2的吸光度測(cè)定規(guī)模為0—3.5，而Multiskan Ascent的吸光度測(cè)定規(guī)模(Abs)達(dá)0～4.0，在0～4.0規(guī)模，線性差錯(cuò)不超越±2.0%，在0.3—3.0吸光度規(guī)模內(nèi)，測(cè)定精細(xì)度CV小于±0.2%;3.0～4.0Abs規(guī)模內(nèi)，測(cè)定精細(xì)度CV小于士0.2%。因而，關(guān)于酶標(biāo)儀的吸光度規(guī)模不用去故意追求大的吸光度規(guī)模，首要要看在必定的吸光度規(guī)模內(nèi)的線性和精細(xì)度怎么。
 

　　3、光學(xué)體系：酶標(biāo)儀的光學(xué)體系選用的是筆直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測(cè)，通常為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測(cè)定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測(cè)定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)體系功用怎么，均可經(jīng)過酶標(biāo)儀測(cè)定的吸光度規(guī)模、線性度、精細(xì)度和度等表現(xiàn)出來。光學(xué)體系好的話，則上述方針也應(yīng)較佳。測(cè)定的精細(xì)度與測(cè)定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可防止因通道紛歧樣所形成的的差異。
 

　　4、檢測(cè)速度：酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度是指其完結(jié)比色測(cè)定所需求的時(shí)刻。檢測(cè)速度快，有利于進(jìn)步檢測(cè)的精細(xì)度，即防止因?yàn)闇y(cè)定進(jìn)程中，因測(cè)守時(shí)刻紛歧樣所形成的的各微孔間吸光度間的差異。當(dāng)前市場(chǎng)上常見的酶標(biāo)儀檢測(cè)速度都非?？?，通常在數(shù)秒鐘內(nèi)，如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2和MK—3檢測(cè)96孔只需2s(接連形式)或5s(步進(jìn)形式)。Multiskan Ascent為單通道檢測(cè)，亦只需9s(接連形式)或14s(步進(jìn)形式)。又如BioRad公司的Benchmark的檢測(cè)速度單波長(zhǎng)為7s，雙波長(zhǎng)為15s。
 

　　5、震板功用：酶標(biāo)儀的震板功用是指酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔進(jìn)行比色測(cè)定前對(duì)其進(jìn)行振動(dòng)混勻，使板孔內(nèi)色彩均一。當(dāng)前市場(chǎng)上常見的酶標(biāo)儀均有震板功用，所紛歧樣的是震板方法，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方法及振動(dòng)起伏等恣意調(diào)理，如Labsystems的MK-2;有的則較為固定，如BioRad 550。運(yùn)用有震板功用的酶標(biāo)儀，在進(jìn)行ELISA測(cè)定顯色反響完結(jié)參加停止劑后，可不用振動(dòng)混勻，直接放人酶標(biāo)儀上測(cè)定即可。
 

　　6、溫育功用：溫育功用是指酶標(biāo)儀自身能按需求主動(dòng)地操控儀器內(nèi)部的溫度，使得ELISA測(cè)定中微孔板條的溫育進(jìn)程可在儀器內(nèi)部完結(jié)，而無需再外配溫箱。當(dāng)前，只要少部分酶標(biāo)儀具有此種功用，如Labsystems公司的Multiskan Ascent，BioRad公司的Benchmark和Biotek公司的ElxS08等。溫育功用僅僅酶標(biāo)儀的一個(gè)附加功用，是不是具有并不能闡明酶標(biāo)儀層次的凹凸及儀器的好壞。作為試驗(yàn)室是不是挑選，則可依據(jù)自個(gè)試驗(yàn)室的條件及需求來決議。
 

　　7、軟件功用：軟件功用是指酶標(biāo)儀所具有的對(duì)ELISA定性和定量測(cè)定及其他測(cè)定方法如酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)、紫外和凝聚等數(shù)據(jù)的核算剖析并陳述成果的功用。軟件功用是中酶標(biāo)儀的一個(gè)非常重要的功用。若是硬件方面差異不大，則軟件就變成斷定酶標(biāo)儀好壞的專一方針。關(guān)于用戶來說，好的軟件功用，對(duì)實(shí)踐作業(yè)會(huì)有較大的協(xié)助。ELISA定性測(cè)定，酶標(biāo)儀如具有陽性判別值(cut-off)及其測(cè)定“灰區(qū)”(即指測(cè)定吸光度處于cut—off周圍的必定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)成果應(yīng)為“可疑”)的核算核算功用，不光方便了試驗(yàn)室作業(yè)人員，并且在某些特定的情況下，有很高的實(shí)用價(jià)值。如血站試驗(yàn)室為篩檢獻(xiàn)血員血進(jìn)行HBsAg、抗HCV和抗HIV等的ELISA測(cè)守時(shí)，常會(huì)遇到測(cè)定吸光度處于cut-off鄰近但又低于cut—off的血，依照試劑盒的規(guī)范，可判為陰性，血為合格血，可用于患者輸血，但直覺通知咱們，這樣的血如輸給患者，致使輸血后相應(yīng)疾病發(fā)作的能夠性較大，這是由ELISA現(xiàn)有的測(cè)定技能的不斷定性所形成的，也即是ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”的存在使得ELISA測(cè)定試劑盒cut-off的設(shè)定僅僅相對(duì)的，此刻的假陽性和假陰性呈現(xiàn)的能夠性較低。因而，在血站篩檢獻(xiàn)血員血時(shí)，如以測(cè)定“灰區(qū)”的下限作為判別獻(xiàn)血員血篩檢不合格規(guī)范，就可以防止因“灰區(qū)”所形成的成果判別過錯(cuò)而導(dǎo)致輸血后疾病發(fā)作的能夠性。適宜的軟件功用關(guān)于ELISA定量測(cè)定相同很重要。有研討標(biāo)明，四參數(shù)方程能較好地反映免疫測(cè)定的劑量反響曲線，zui為合適于定量酶免疫測(cè)定的曲線擬合。因而，如意圖是定量測(cè)定，則在酶標(biāo)儀的軟件功用中，*要有這種曲線回歸方程核算剖析功用。其他比如連點(diǎn)、直線等回歸核算，則可依據(jù)酶標(biāo)儀的運(yùn)用意圖而定，如兼用于微量生化測(cè)定，則此類回歸核算就很有必要。
 

　　:此外，酶標(biāo)儀兼做酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)、凝聚反響測(cè)定所需的軟件是不是應(yīng)具有，當(dāng)然也應(yīng)依據(jù)運(yùn)用意圖而定。因?yàn)榇祟愜浖ǔ６驾^為貴重，酶標(biāo)儀常別的獨(dú)自按需裝備，若是不是試驗(yàn)室特殊需求，就不用強(qiáng)求這種軟件功用。
 

　　8、言語界面 通常進(jìn)口的中酶標(biāo)儀人機(jī)對(duì)話多選用英文。這關(guān)于某些底層試驗(yàn)室能夠會(huì)存在言語方面的艱難，然后難以zui大極限地發(fā)揚(yáng)酶標(biāo)儀的作用。為處理這方面的疑問，已有一些酶標(biāo)儀選用了中文界面，如Labsystems的MK-3。這樣就大大方便了廣闊底層試驗(yàn)室技能人員的運(yùn)用。
 

　　綜上所述，雖然酶標(biāo)儀的開展極為疾速，種類繁復(fù)，功用也不斷加強(qiáng)，但其zui底子的功用是不變的，即比色測(cè)定。大凡比色測(cè)定，其底子需求即是在必定吸光度規(guī)模內(nèi)要有好的測(cè)定性、線性和精細(xì)性。相同的吸光度規(guī)模，測(cè)定的性、線性和精細(xì)性越好則酶標(biāo)儀亦越佳。并且，因?yàn)橛糜诿笜?biāo)儀比色測(cè)定的為多孔(通常為96孔)微孑L板條，為確保測(cè)定的孔間重復(fù)性，則測(cè)定速度也是一個(gè)較重要的功能方針。至于其他如震板、溫育及有關(guān)的軟件功用，則可依據(jù)各自試驗(yàn)室的需求去對(duì)比挑選。