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          小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)原理

          來源:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司   2019年01月25日 15:40  

          小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)原理
          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)。用純化的小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入谷草轉(zhuǎn)(GPT),再與  HRP 標(biāo)記的谷草轉(zhuǎn)(GPT)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)(GPT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的谷草轉(zhuǎn)長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)濃度。
          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
          2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
          操作步驟
          1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
          釋。
          2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。30倍稀釋后備用
          配液:將 30倍濃
          洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復(fù) 5次,拍干。30秒后棄去
          加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
          操作程序總:
          計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
          小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫分析注意事項(xiàng)
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會(huì)有析出,稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響。
          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
          6.底物請(qǐng)避光保存

          小鼠谷草轉(zhuǎn)(GPT)酶聯(lián)免疫保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:;2-8℃。

          2.有效期:6個(gè)月

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