關(guān)于進(jìn)口化妝品洋蔥伯克霍爾德菌的檢驗(yàn)方法！

洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacia,BC)曾名為洋蔥假單胞菌(Pseudomonas cepacia),因引起洋蔥球莖腐爛而得名,1993年改為現(xiàn)名。

一、生物學(xué)特性：

洋蔥伯克霍爾德菌為革蘭陰性桿菌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，一般在普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好,zshihe生長(zhǎng)溫度為30℃，在4℃不生長(zhǎng)，42℃生長(zhǎng)不定。

二、分布范圍：

洋蔥伯克霍爾德菌存在于土及水中,在醫(yī)院環(huán)境中常污染自來(lái)水體溫計(jì)噴霧器、血管導(dǎo)管、導(dǎo)尿管、靜脈輸液器等，因而可多種醫(yī)院內(nèi)感染,包括敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎、傷口感染、膿腫、眼結(jié)膜炎等，是條件致病菌。其細(xì)胞膜的不通透性使其對(duì)大多數(shù)抗生素產(chǎn)生耐藥，在醫(yī)院易引起暴發(fā)流行，是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。

三、檢驗(yàn)流程：

根據(jù)SN/T4684-2016進(jìn)出口化妝品洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法規(guī)定，檢驗(yàn)流程如下：

四、典型菌落特征：

含多粘菌素B、慶大霉素的BCSA瓊脂：紅色圓形菌落，表面光滑，周?chē)囵B(yǎng)基變紅

含多粘菌素B、慶大霉素的麥康凱瓊脂：淺黃褐色圓形菌落，表面光滑，周?chē)囵B(yǎng)基不變色

五、生化鑒定：

1、葡萄糖氧化實(shí)驗(yàn)：

挑取可疑菌落，接種于2 支葡萄糖發(fā)酵管，其中一支加滅菌液體石蠟封口，另一支不封口，36℃土1℃，24h。二者均變黃為葡萄糖發(fā)酵型，未加石蠟管變黃而加石蠟管不變色為葡萄糖氧化型。

選擇葡萄糖氧化型，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線(xiàn)純化培養(yǎng)，36℃士1℃，24 h。純培養(yǎng)養(yǎng)物繼續(xù)進(jìn)行鑒定。

2、革蘭氏染色：

挑取可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色。顯微鏡鏡下觀(guān)察，洋蔥伯克霍爾德菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。

3、氧化酶試驗(yàn)：

用玻璃棒或一次性接種針挑取單個(gè)特征性菌落，涂布在氧化酶試劑濕潤(rùn)的濾紙平板上。洋蔥伯克霍爾德菌為遲緩型氧化酶陽(yáng)性（紫紅色、紫色、或深藍(lán)色），反應(yīng)時(shí)間約為2min - 10min。

注：實(shí)驗(yàn)中切勿使用鎳/鉻材料

4、過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)：

用玻璃棒或一次性接種針挑取單個(gè)特征性菌落，置于潔凈室管內(nèi)，滴加3%過(guò)氧化氫溶液（臨用時(shí)配置）2ml,觀(guān)察氣泡產(chǎn)生情況。洋蔥伯克霍爾德菌為遲緩產(chǎn)氣，1s后出現(xiàn)氣泡。

5、蔗糖氧化實(shí)驗(yàn)：

挑取可疑菌落接種于蔗糖氧化培養(yǎng)基上，36℃±1℃，24h。培養(yǎng)基變黃色為陽(yáng)性，藍(lán)色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽(yáng)性反應(yīng)。

6、枸櫞酸鹽利用：

挑取可疑菌落接種于西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)24h，培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽(yáng)性，淺綠色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽(yáng)性反應(yīng)。

7、七葉苷利用：

挑取可疑菌落接種于七葉苷培養(yǎng)基，30℃士1℃培養(yǎng) 24 h ，培養(yǎng)基變黑色為陽(yáng)性，不變色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽(yáng)性反應(yīng)。

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