微生物實(shí)驗(yàn)中幾種常用的稀釋劑！

微生物檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)中取樣后常常要做一系列的稀釋?zhuān)鸵玫较♂寗疚膶⑹称窓z驗(yàn)或者試驗(yàn)中要用到的幾種稀釋劑做了一個(gè)概括介紹。

大多數(shù)細(xì)胞都適合在pH值7.2-7.4范圍內(nèi)生長(zhǎng),當(dāng)然不同種類(lèi)細(xì)胞對(duì)pH值的要求也不盡一致,同一種細(xì)胞在不同生長(zhǎng)時(shí)期的適pH值也有所不同。原代培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)pH值要求較嚴(yán),傳代培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)pH值要求較寬。一般來(lái)講,細(xì)胞對(duì)偏酸環(huán)境的耐受性要強(qiáng)于偏堿環(huán)境。培養(yǎng)過(guò)程中，嚴(yán)格控制培養(yǎng)液的pH值,有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)越旺盛,代謝越活躍,pH值改變?cè)窖杆?。代謝物的滯留使培養(yǎng)液變酸變黃,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。因此，通常在培養(yǎng)液中均加入一定量的緩沖液,以保持pH值在一定范圍內(nèi)的相對(duì)穩(wěn)定。

平衡鹽溶液（Balanced Salt Solution，BSS)與細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)下的pH值、滲透壓等環(huán)境狀態(tài)一致，具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量和無(wú)機(jī)鹽成分等作用，可滿(mǎn)足體外實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞生存并維持一定的代謝的基本需要。細(xì)胞在BSS中可生存幾個(gè)小時(shí)，且BSS配方簡(jiǎn)單，成本低，因此成為配制各種組織細(xì)胞培養(yǎng)用液的基礎(chǔ)溶液，也是組織細(xì)胞體外短暫保存，分離、純化和洗滌等實(shí)驗(yàn)操作的常用溶液。

磷酸鹽緩沖液(PBS)是的平衡鹽溶液(BSS)之一。由磷酸一氫鹽和磷酸二氫鹽的混合溶液組成,其中磷酸一氫鹽是呈堿性的,而磷酸二氫鹽是呈酸性的。當(dāng)微生物分泌酸性物質(zhì)時(shí)會(huì)與磷酸一氫鹽反應(yīng)生成磷酸二氫鹽；當(dāng)分泌堿性物質(zhì)時(shí)則與磷酸二氫鹽反應(yīng)生成磷酸一氫鹽。這樣就使整個(gè)體系維持在一個(gè)PH較穩(wěn)定的范圍。由于磷酸緩沖液近中性，恰在生理性pH范圍緩沖力，且成本相對(duì)較低，成為生命科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用普及的無(wú)機(jī)鹽緩沖液，也是免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室*的常用緩沖液之一。

0.85%生理鹽水能保持細(xì)胞內(nèi)衛(wèi)的滲透壓一致，避免細(xì)菌的細(xì)胞壁被破壞而影響細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。避免細(xì)胞破裂，它可以使細(xì)胞在一個(gè)液體環(huán)境中，維持正常生理學(xué)平衡。避免操作過(guò)程中微生物失水或吸水過(guò)多，導(dǎo)致死亡。菌落總數(shù)要求不太高，但是生理鹽水對(duì)于滲透壓的維持還是有一定作用的，特別是對(duì)于那些“半死半活”細(xì)菌的檢出很重要。但生理鹽水也不是在任何情況下都適用的，檢測(cè)鹽份較高的樣品時(shí)（如烤鰻、醬油等），不適合采用生理鹽水，這種情況下用蒸餾水更合適。磷酸鹽緩沖稀釋液是SN（出口食品行業(yè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)）檢測(cè)菌落總數(shù)時(shí)推薦時(shí)，在GB中倒沒(méi)明確提出這個(gè)，而是一般性推薦生理鹽水。由于磷酸鹽緩沖稀釋液配制較為復(fù)雜，所以在正常情況下檢測(cè)一般樣品用生理鹽水，當(dāng)樣品鹽份較高時(shí)用蒸餾水。

無(wú)菌水通常是滅菌后的蒸餾水。做霉菌和酵母檢驗(yàn)的稀釋液，用的就是蒸餾水。GB 4789.15-1994使用過(guò)高鹽查氏培養(yǎng)基，樣品稀釋再使用生理鹽水，容易搞亂鹽濃度。所以，標(biāo)準(zhǔn)制定者叫選擇了蒸餾水。實(shí)際上，蒸餾水無(wú)論對(duì)于單細(xì)胞的原核生物還是真核生物，都是有害的。從GB/T 4789.15-2003開(kāi)始，刪除了這種培養(yǎng)基。但是沒(méi)有改變蒸餾水。在具體工作中，還是盡量不要使用蒸餾水來(lái)稀釋樣品為好。因?yàn)橥ǔＲ环輼悠烦３Ｐ枰瑫r(shí)檢驗(yàn)細(xì)菌和真菌，不可能單獨(dú)稱(chēng)量，之后分別稀釋的。

蛋白胨是動(dòng)植物蛋白經(jīng)酶水解后的月示、胨、肽及氨基酸等復(fù)雜的混合物，吸濕性很強(qiáng)，易溶于水，系兩性電解質(zhì)，有一定緩沖作用。有學(xué)者自己做實(shí)驗(yàn)時(shí)候用蛋白胨水代替磷酸鹽或者生理鹽水稀釋?zhuān)康氖亲寴悠分芯N在稀釋過(guò)程中保持活性，免于死亡，但是稀釋時(shí)間一定要控制在15分鐘之內(nèi)。

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