主要用途
尼羅紅熒光染色溶液是一種旨在通過與脂類物質(zhì)的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測信號，快速、敏感、可靠
地活體定量測定細(xì)胞內(nèi)脂類成分的常用熒光染料。適用于各種細(xì)胞包括細(xì)菌細(xì)胞，也用于蛋白質(zhì)電泳染色。
產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，著色清晰靈敏。 

技術(shù)背景
尼羅紅染色劑（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一種親脂性的惡嗪類熒光染
料。與脂類物質(zhì)包括臘酯（wax ester）和三酰甘油（triacylglycerol）以及各種脂肪酸結(jié)合后，在激發(fā)波長
543nm 的激發(fā)下，顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光（散發(fā)波長 598nm）。同時在紫外光的照射下顯示紅色。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液（Reagent A） （0.5 毫克/毫升） 毫升
產(chǎn)品說明書 1 份
保存方式
保存 染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證 6 月

用戶自備
HANK 平衡鹽緩沖溶液（ ）或 PBS 緩沖溶液（ ）：用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（ ）：用于細(xì)胞脫離
*細(xì)胞培養(yǎng)液（ ）：用于細(xì)胞處理所需的培養(yǎng)基
15 毫升錐形離心管：用于細(xì)胞收集的存放
微型臺式離心機(jī)：用于細(xì)胞沉淀收集
臺式離心機(jī)：用于細(xì)胞沉淀收集
1.5 毫升離心管：用于細(xì)胞檢測操作的容器
2 毫升離心管：用于染色工作液配制的容器
37℃培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物
比色皿：用于熒光定量分析
熒光顯微鏡：用于觀察熒光細(xì)胞
熒光分光光度儀：用于定量檢測熒光細(xì)胞和脂類產(chǎn)量

實(shí)驗(yàn)提示
方法一、間接法
實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent A）凍融，置入冰槽里。然后進(jìn)行下列操作。
1． 開啟熒光顯微鏡或熒光分光光度儀
2． 小心抽掉 25cm2
細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
3． 加入 3 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 1 毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養(yǎng)平面
6． 置入 37℃培養(yǎng)箱 1 分種
7． 振動培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落
8． 加入 5 毫升用戶自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
9． 移入 15 毫升錐形離心管
10．放進(jìn)臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 300g 
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
13．移入到新的 1.5 毫升離心管
14．加入 xx 微升 染色液（Reagent A）到離心管
15．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
16．在 37℃培養(yǎng)箱孵育 10 分鐘，避免光照
17．放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 30 秒，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
18．小心抽去上清液
19．加入 1 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
20．（選擇步驟）放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 30 秒，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
21．（選擇步驟）小心抽去上清液
22．（選擇步驟）加入 1 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
23．檢測方法
A） 熒光顯微鏡定性分析
1） 移出 10 微升離心管中的混勻物到載玻片上
2） 放上蓋玻片或封片
3） 在熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞：激發(fā)波長 543nm，散發(fā)波長 598nm――顯示強(qiáng)烈桔紅色熒
光細(xì)胞的為脂類豐富的陽性細(xì)胞
B） 熒光分光光度計(jì)定量分析
1） 移取 1 毫升細(xì)胞懸液到 1 毫升比色皿
2） 放進(jìn)熒光分光光度計(jì)測讀：激發(fā)波長 543nm，散發(fā)波長 598nm――確定活體細(xì)胞脂類產(chǎn)量
方法二：直接法
實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent A）凍融，然后移出 2 毫升用戶自備的 HANK 平
衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到 2 毫升離心管，加入 2 微升 染色液（Reagent A），混勻后，置
入冰槽里，標(biāo)記為 染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。
1． 開啟熒光顯微鏡
2． 小心抽掉 25cm2
細(xì)胞培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液
3． 加入 3 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 2 毫升 染色工作液
6． 在 37℃培養(yǎng)箱孵育 10 分鐘，避免光照
7． 在熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞：激發(fā)波長 543nm，散發(fā)波長 598nm――顯示強(qiáng)烈桔紅色熒光細(xì)胞的為
脂類豐富的陽性細(xì)胞
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為 1 毫升（0.5 毫克/毫升）規(guī)格
2． 操作時須戴手套
3． 用戶可以參考本產(chǎn)品的操作步驟用于細(xì)胞分析
4． 本產(chǎn)品可用于識別、定量、以及動態(tài)觀察細(xì)胞脂類物質(zhì)變化
5． 尼羅紅為通透性的染料，可以自由進(jìn)入細(xì)胞
6． 根據(jù)細(xì)胞株的差異，可以適當(dāng)調(diào)整染料劑量，以增強(qiáng)或降低熒光強(qiáng)度
7． 細(xì)胞培養(yǎng)液里避免使用脂類物質(zhì)
8． 孵育時，必須避免光照
9． 使用時，避免污染母液
10．建議細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測分析
11．熒光波長可以用激發(fā)波長 475nm，散發(fā)波長 580nm 替代
12．建議使用本公司的相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行細(xì)菌或蛋白方面的尼羅紅染色分析
13．本公司提供系列尼羅紅檢測試劑產(chǎn)品
 
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰