安捷倫二維液相色譜精準助力應對 2020 版藥典 0722 維生素 D 測定第四法

維生素 D 是人體所必須的脂溶性維生素。維生素D的基本作用是能促進鈣和磷的吸收，缺乏維生素 D，會影響鈣的吸收和骨代謝，最終引起佝僂病、軟骨癥或骨質疏松癥等。作為藥物的維生素 D 相關制劑是補充維生素 D 缺乏的最直接的途徑。準確測定維生素 D 及其前體的含量，能夠保證維生素 D 達到目標的效價，從而保證藥物的有效性和安全性。

安捷倫二維液相色譜精準助力應對

 2020 版藥典 0722 

維生素 D 測定第四法

2020 版藥典 0722 新增維生素 D 測定第四法相關背景

維生素 D 測定的難點在于含維生素 A 醇及其他相應脂溶性雜質的供試品，如維生素 AD 軟膠囊、滴劑等，其基質中存在大量油性輔料（大豆油）和維生素 A 醇的干擾，同時維生素 D2/D3 含量低（部分品種維生素 D2/D3 含量僅占 1‰ 左右) ，加上維生素 D 易受光熱影響產生前維生素 D（pre-vitamin D）、反式維生素 D (Trans vitamin D)、速甾醇（tachysterol）和光甾醇（lumisterol）等。對于本類樣品，2015 版藥典和 2020 版藥典的第二法和第三法，通常需要將樣品進行皂化、有機溶劑液液萃取，結合反相色譜系統(tǒng)凈化，最后再采用正相色譜系統(tǒng)進行定量檢測。方法測定結果的準確性和重現(xiàn)性較難控制，也嚴重影響方法的分析效率。

 通過二維柱切換的液相色譜技術不僅可以提升系統(tǒng)分離能力，改善結構相似化合物的分離分析；同時可以通過第一維的初步分離去除樣品基質中大量雜質成分干擾，實現(xiàn)樣品凈化。因此 2020 版藥典 0722 維生素 D 測定新增了第四法即在線二維液相色譜法，方法第一維和第二維均采用正相色譜體系，其主要優(yōu)點是樣品可用正己烷溶解后直接進樣分析，且具有載樣量大，易去除非極性基質干擾成分，同時維生素 D 與其他羥基化的代謝物分離良好等優(yōu)點。

安捷倫的應對方案

儀器系統(tǒng)的基本搭配如圖 1 所示，整體上需要兩套泵、一個兩位六通切換閥、單或雙紫外檢測器組成。

主要色譜條件

色譜柱：

第一維：ChromCore VD-ChP4, 2.1*150mm，3μm（納譜分析，貨號S015-030012-02115S）；

第二維：Zorbax Silica, 3.0*100mm, 1.8μm（Agilent Technologies，貨號 828975-301）；