Luna C18及Luna系列色譜柱的保養(yǎng)和使用技巧
一般信息
Phenomenex制造的每個(gè)Luna色譜柱都是單獨(dú)制備和測試的。每根色譜柱均有一份質(zhì)量保證(CQA)證書,其指示檢測條件,運(yùn)行參數(shù),和色譜柱的信息。該色譜柱的詳細(xì)信息,包括規(guī)格和性能測試結(jié)果應(yīng)被輸入到信息管理系統(tǒng),方便跟蹤和參考。您還可以從以下網(wǎng)站獲取質(zhì)量文檔的電子副本。
檢查
收到色譜柱后,請確認(rèn)您收到的色譜柱是您訂購的色譜柱(即尺寸,粒徑,介質(zhì))。此外,請檢查色譜柱是否在運(yùn)輸過程中可能造成任何物理損壞。立即測試色譜柱以驗(yàn)證性能并將測試結(jié)果記錄在色譜柱信息管理系統(tǒng)中。
???色譜柱特
*在梯度條件下的pH穩(wěn)定性。在等度條件下,pH穩(wěn)定性為1.5-10。
*在梯度條件下,pH范圍為1.5-9。在等度條件下,pH范圍為1.5-10。
運(yùn)輸溶劑
除非在色譜柱標(biāo)簽上另有說明,否則Luna CN和NH 2色譜柱以乙腈/己烷(1:99 v / v)裝運(yùn)。Luna SCX色譜柱以150 mM 磷酸銨(pH 6.0)裝運(yùn),Luna HILIC色譜柱以HILIC條件(乙腈/ 100 mM甲酸銨pH 3.2(90:10 v / v))裝運(yùn)。所有其他Luna固定相均已裝運(yùn)乙腈/ H2O(65:35 v / v)。
典型流量,背壓,溫度:
以下是Luna HPLC和UHPLC色譜柱通用尺寸的一些典型值。這些數(shù)字不是絕對值,并且會(huì) 根據(jù)液相色譜系統(tǒng),運(yùn)行參數(shù)和樣品分析物/基質(zhì)而有所不同。下面的值是使用乙腈和水的溶劑系統(tǒng)創(chuàng)建的。
典型流速(與粒徑無關(guān)):
1、內(nèi)徑4.6 mm時(shí)為1.0 mL / min
2、內(nèi)徑2.1 mm時(shí)為0.2-0.6 mL / min
最大背壓:
? 3、1.6um>15,000psi(1034bar)可能損害柱壽命。
? 4 、3μm或5μm > 5000 psi(345 bar)可能會(huì)損害色譜柱的壽命。
最高溫度:
? 5、Luna色譜柱推薦最高溫度是60℃,但溫度范圍依賴于你的運(yùn)行參數(shù)。
? 6、在最高溫度極限下連續(xù)使用Luna色譜柱可能會(huì)損害色譜柱的使用壽命。
? ?7、基于常見的流動(dòng)相擴(kuò)大了Luna Omega相的溫度使用范圍:
a.甲酸:90°C(C18,Polar C18),80°C(PS C18)
b.三氟二酸:80°C(C18,Polar C18), 60°C(PS C18)
c. pH 7.5磷酸鹽緩沖液:50°C(C18), 30°C(Polar C18),50°C(PS C18)
d. pH 8.5的碳酸氫銨緩沖液:50°C(C18),30°C (Polar C18),50°C (PS C18)
流動(dòng)相兼容性
當(dāng)使用任何HPLC / UHPLC柱,一定要使用僅HPLC級溶劑和材料,同時(shí)也避免不混溶的溶
劑/緩沖溶液。
此外,強(qiáng)烈建議使用溶劑過濾來從您選擇的流動(dòng)相中除去痕量雜質(zhì)。以下Luna系列色譜柱在
100%水性條件下穩(wěn)定:Polar C18,PS C18,PFP( 2)和SCX。所有Luna色譜柱在100%
有機(jī)條件下均穩(wěn)定,但請確保流動(dòng)相的pH值不超過各個(gè)固定相的限值。有關(guān)各個(gè)Luna固定
相pH限值的信息,請參見色譜柱特征部分中的圖表。
色譜柱安裝
LC系統(tǒng)的初始設(shè)置對于確保色譜柱性能非常重要:
確保您的液相色譜系統(tǒng)已準(zhǔn)備就緒:
1.密封管路,進(jìn)樣口清潔
2.流動(dòng)相管路無干線或氣泡
3.穩(wěn)定的基線
4.一致的壓力
用流動(dòng)相沖洗液相色譜系統(tǒng)泵和管線(HPLC級,可與色譜柱附帶的溶劑混溶)。
流動(dòng)相起始條件檢查清單:
1.在使用前,請確保HPLC級流動(dòng)相充分混合,過濾和脫氣。
2.確保色譜柱運(yùn)輸溶劑,液相色譜系統(tǒng)中剩余的溶劑和流動(dòng)相溶劑可混溶。
將流速設(shè)置為0.1 mL / min(對于2.1-4.6 mm內(nèi)徑),并安裝色譜柱,確保箭頭指向流動(dòng)方向。然后將流速增加至0.2 mL / min(2.1mm 內(nèi)徑)或1.0 mL / min(4.6 mm 內(nèi)徑)5-10分鐘。將溶劑收集在一個(gè)小燒杯中。
停止流動(dòng) ,并擦拭出口端的柱 ,以除去任何顆粒連接到前檢測器。
將配件/管安裝到出口端,并在監(jiān)測背壓的同時(shí)以低流量(?0.2 mL / min)運(yùn)行至少10個(gè)色譜柱體積。
1.穩(wěn)定的壓力應(yīng)表示流量恒定,而壓力波動(dòng)則表示系統(tǒng)中有空氣。
2.在壓力寬波動(dòng)可能沖擊和損壞列,以便監(jiān)視它的重要壓力。
監(jiān)測壓力以及檢測器發(fā)出的信號,當(dāng)兩者穩(wěn)定后,就可以使用色譜柱了。
測試色譜柱性能
測試色譜柱性能時(shí),請使用制造商認(rèn)可的測試混合物。
色譜柱清洗
色譜柱清洗
反相:
• 用接近系統(tǒng)上最后一個(gè)溶劑系統(tǒng)的梯度進(jìn)行清潔:
典型的裝載能力
例如,如果最后一次進(jìn)樣以緩沖液/乙腈(75:25)結(jié)尾,則更合適的方法是從95:5 H 2 O / 乙腈開始,然后根據(jù)需要逐步移動(dòng)以增加
有機(jī)物含量(即75:25 H 2 O /乙腈50:50 H 2 O /乙腈5:95 H 2 O /乙腈)。
• 對于疏水性或油性材料,請嘗試用二氯甲烷沖洗 。
或IPA。使用IPA時(shí),請確保使用低流量以防止由于較高的溶劑粘度而導(dǎo)致較高的背壓。
• 對于疏水性很強(qiáng)的材料,請嘗試使用THF 。
正常階段:
• 用10倍柱體積的氯仿,IPA和/或二氯甲烷進(jìn)行沖洗。
• 然后用流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)節(jié)。
Tips:
• 清潔時(shí),將流速設(shè)置為低于方法流速 。
• 特別是在嘗試使用甲醇或IPA進(jìn)行清潔時(shí)。
• 較長時(shí)間的清潔比增加更多的循環(huán)更有利。
• 建議不要使用非常大量的THF,特別是如果系統(tǒng)有塑料管。如果管道是金屬,則用THF清洗是可以的。
• 嘗試反向沖洗色譜柱;逆著列標(biāo)簽上箭頭的方向緩慢流動(dòng)。
柱再生
反相• 進(jìn)行與上述清潔相同的梯度沖洗,并在低流量下通宵過夜。
正相• 為了除水,請沖洗:
1.30毫升己烷中的2.5%2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸。
2.然后從上方用清洗方法沖洗色譜柱,以低流速過夜 。
柱存儲(chǔ)
在保存之前,請確保您的色譜柱是干凈的,這一點(diǎn)非常重要。這包括去除緩沖液,鹽,樣品和離子對試劑。
推薦的存儲(chǔ)條件是:
• 反相:乙腈/ H 2 O(65:35 v / v),可用甲醇代替乙腈。
• 正相:100%己烷或IPA
• 離子交換:100%甲醇
• HILIC:乙腈/ H 2 O(80:20 v / v)
延長色譜柱壽命的技巧
• 利用樣品制備技術(shù),例如固相提?。ǖ貙?reg; -X SPE產(chǎn)品)或配件(PHENEX ™注射式過濾器) ,以不希望的污染物的噴射最大限度地減少到您的系統(tǒng)和柱。
• 使用正確的保護(hù)柱或保護(hù)柱系統(tǒng)(SecurityGuard ™)幫助清除顆粒,以免污染 色譜柱。
• 不要使色譜柱超載。注入合適的樣品濃度和體積。見圖表:典型 加載 容量
• 在色譜柱的合適分離模式下工作 。有關(guān)每個(gè)固定相使用的典型模式,請參見列特性圖。
• 將色譜柱存放在適當(dāng)?shù)娜軇┲小?/span>
• 溶劑通過從一個(gè)混溶相緩慢馴化正確地切換 溶劑 到 所述 其他 在 一個(gè) 低 流量: 0.1 毫升/分鐘 為 2.1 毫米 ID 和內(nèi)徑4.6 mm時(shí)為0.5 mL / min。
保修
Phenomenex HPLC色譜柱保證達(dá)到規(guī)定的性能和質(zhì)量,并且不存在材料和工藝上的缺陷。如果您不滿意的任何理由,請致電PHENOMENEX售后技術(shù)部。我們將竭盡所能解決問題,使您滿意。如果有必要退回該列,則必須先從Phenomenex獲得退回授權(quán)號。
免責(zé)聲明
新色譜柱應(yīng)使用制造商推薦的測試混合物進(jìn)行測試,而先前使用的色譜柱應(yīng)使用相同或合適的測試混合物進(jìn)行分析。記得重新平衡系統(tǒng)使用高純度的溶劑。切勿從一種溶劑變?yōu)椴换烊艿牧硪环N溶劑,而不要經(jīng)過可與兩種溶劑混溶的中間溶劑。這會(huì)損壞色譜柱。切勿將緩沖液/鹽不溶于第二種溶劑的溶液更改為緩沖液/鹽的溶液。同樣,這會(huì)損壞色譜柱。切勿嘗試卸色譜柱,這將使保修無效。
柱震蕩
小心處理色譜柱。請勿跌落或造成物理震動(dòng)。不要以高流量啟動(dòng)泵,而要在幾分鐘后逐漸增加流量。設(shè)置泵壓力極限,以在發(fā)生堵塞時(shí)保護(hù)色譜柱。這會(huì)產(chǎn)生空隙,將對色譜柱的性能產(chǎn)生不利影響。
感謝您的閱讀。若有色譜柱疑問請咨詢飛諾美代理商:廈門廣晟達(dá)儀器設(shè)備有限公司
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