病理切片是什么？病理切片是取一定大小的病變組織，用病理組織學(xué)方法制成病理切片〔通常將病變組織包埋在石蠟塊里，用切片機(jī)切成薄片，再用蘇木精－伊紅(H-E)染色〕，用顯微鏡進(jìn)一步檢查病變。病變的發(fā)生發(fā)展過程，最后作出病理診斷。

它制作時(shí)將部分有bing變的組織或臟器經(jīng)過各種化學(xué)品和埋藏法的處理，使之固定硬化，在切片機(jī)上切成薄片，粘附在玻片上，染以各種顏色，供在顯微鏡下檢查，以觀察病理變化，作出病理診斷，為臨床診斷和治療提供幫助。

那病理切片的制作步驟是怎么樣的呢？一起了解一下：

 1．取材

（1）材料新鮮：取材組織愈新鮮愈好，人體組織一般在離體后，動(dòng)物組織在處死后迅速固定，以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。

（2）組織塊的大?。核〗M織塊較理想的體積為2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內(nèi)部，但根據(jù)制片材料和目的不同，組織塊的較理想體積也不同，如制作病理外檢、科研切片，其組織塊可以薄取0.1～0.2cm即可，這樣可以縮短固定脫水透明的時(shí)間，若制作教學(xué)切片厚取0.3～0.5cm，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。

（3）勿擠壓組織塊：切取組織塊用的刀剪要鋒利，切割時(shí)不可來回銼動(dòng)。夾取組織時(shí)切勿過緊，以免因擠壓而使組織、細(xì)胞變形。

（4）規(guī)范取材部位：要準(zhǔn)確地按解剖部位取材，病理標(biāo)本取材按照各病變部位、性質(zhì)的不同，根據(jù)要求規(guī)范化取材。

（5）選好組織塊的切面：根據(jù)各器官的組織結(jié)構(gòu)，決定其切面的走向。縱切或橫切往往是顯示組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，如長(zhǎng)管狀器官以橫切為好。

（6）保持材料的清潔：組織塊上如有血液、污物、黏液、食物、糞便等，可用水沖洗干凈后再放入固定液中。

（7）保持組織的原有形態(tài)：新鮮組織固定后，或多或少會(huì)產(chǎn)生收縮現(xiàn)象，有時(shí)甚至*變形。為此可將組織展平，以盡可能維持原形。

2．固定

（1）小塊組織固定法：這是方法，從人體或動(dòng)物體取下的小塊組織，須立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為1:4～20，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為2.0cm×2.0cm×0.3cm。

（2）注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部，或需要對(duì)整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物體進(jìn)行固定。這時(shí)宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織和全身，從而得到充分的固定。

（3）蒸汽固定法：比較小而厚的標(biāo)本，可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。

3．脫水透明

標(biāo)本經(jīng)過固定和沖洗后，組織中含有較多的水分，必須將組織塊內(nèi)的水分置換出來，這一過程叫作脫水。無論是用石蠟切片，還是用火棉膠切片，都必須除去組織中所含水分，因含水組織與石蠟、火棉膠等包埋材料不相容，常用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。脫水的步驟是：80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇2小時(shí)，此過程可用脫水機(jī)自控完成。丙酮也是一種脫水能力很強(qiáng)的脫水劑，但因其脫水能力很強(qiáng)，對(duì)組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學(xué)切片時(shí)一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經(jīng)過一個(gè)能溶于石蠟的溶劑替代過程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、水楊酸甲酯等。

4．浸蠟、包埋

（1）使石蠟浸入組織中，取代組織中含有的透明劑。

（2）包埋：將浸蠟后的組織置于融化的固體石蠟中，石蠟?zāi)毯螅M織即被包在其中，稱蠟塊，此過程稱為包埋。

5．切片和貼片

（1）修整蠟塊：可視其組織的大小，在組織邊緣約0.1～0.2cm處，切去余蠟部分，否則易造成組織皺縮不平。

（2）準(zhǔn)備好切片用具：切片刀、毛筆、眼科鑷子（彎）、漂烘溫控儀

（3）安裝蠟塊：將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。

（4）安裝切片刀：將切片刀安裝在切片機(jī)的刀臺(tái)上，把刀臺(tái)上的緊固螺絲旋緊，使切片時(shí)不產(chǎn)生振動(dòng)，能保持一定的切片厚度。

（5）切片的厚度：切片機(jī)的厚度調(diào)節(jié)器上刻有0～50μm或0～25μm，可任意選擇其厚度，石蠟切片的厚度一般在4～6μm。

（6）切片

（7）鋪片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40～45℃的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶自然展平。

（8）貼片、烘片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余水，置入60～65℃恒溫箱內(nèi)或切片漂烘溫控儀的烘箱內(nèi)烤片15～30分鐘，脫去溶化組織間隙的石蠟。

6．染色和封片

常用的染色方法是蘇木素-伊紅（Hematoxylin-Eosin）染色法，簡(jiǎn)稱H.E染色法。這種方法對(duì)任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料，可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色，如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等；伊紅是一種酸性染料，可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色，如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在H.E染色的切片中均呈紅色。H.E染色程序如下：脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固。常規(guī)蘇木素染色中的對(duì)比染色是用伊紅，近年來在英、美國(guó)家的一些實(shí)驗(yàn)室則采用焰紅（phloxine），此外也有用桔黃G（Orange G）、比布里希猩紅（Biebrich scarlet）、波爾多紅（Bordeaux red）等作為對(duì)比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。

那么在常規(guī)組織制片中，切片是最重要的技術(shù)之一，其質(zhì)量好壞直接影響標(biāo)本的觀察效果。好的切片 機(jī)是整個(gè)制備過程的重要環(huán)節(jié)，要制備1張好的切片，病理工作人員必須將技術(shù)、知識(shí)和技巧進(jìn)行結(jié)合。

首先，待切樣品的質(zhì)量是關(guān)鍵因素，而樣品質(zhì)量取決于前期處理工作的準(zhǔn)確無誤，包括固定、脫水、包埋等；必須選擇正確型號(hào)的切片機(jī)以及合適的鋼刀或一次性刀片；切片時(shí)需認(rèn)真考慮樣品類型、大小、厚度，兼顧操作者的便利性和舒適性。其次，要切出高質(zhì)量的切片，操作者豐富的經(jīng)驗(yàn)不能少。操作者必須懂得切片機(jī)的工作原理，對(duì)機(jī)器進(jìn)行精細(xì)調(diào)節(jié)以達(dá)最佳效果；能應(yīng)對(duì)常見故障，消除一些潛在的影響因素；無論使用鋼刀還是一次性刀片，切緣必須鋒利，且不能有任何缺口或雜質(zhì)附著。