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細胞培養(yǎng)專題——6孔板接種和換液
?。?）問：我的細胞傳代很正常，但一種到六孔板里（不管加藥和對照），總有兩三個孔（隨機）細胞長得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎？到底是啥原因呢？請各位指點
答：可能跟你加液的溫度有關。如果你細胞剛剛拿出來換液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細胞就會凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。
另外，跟你細胞的生長狀態(tài)也有關。加藥之前的細胞可以用高點的血清濃度培養(yǎng)。保證細胞狀態(tài)良好。
或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養(yǎng)板本身的問題，你再換換其他培養(yǎng)板試試看。再有可能就是細胞狀態(tài)問題了，種板時的血清濃度調高試一下
?。?）問：最近幾天，我用六孔培養(yǎng)板接種細胞，培養(yǎng)24小時后更換培養(yǎng)基，在更換培養(yǎng)基之前，顯微鏡觀察到細胞貼壁，狀態(tài)非常的好，更換了培養(yǎng)基后，立即用顯微鏡觀察，發(fā)現每個孔中都近乎有一半的細胞表現出近乎死亡的狀態(tài)。細胞變得非常小，產生大量的碎片，而另一半的細胞一切正常，異常細胞與正常細胞之間存在一條分水嶺，上半個圓是好的，下半個圓就不好，這是怎么一回事？
答：你可以看一下是不是培養(yǎng)板沒放水平。有一回我也出現過這種情況。你的培養(yǎng)液如何，如果培養(yǎng)液過期，細胞就不會貼壁。換一點新配制的培養(yǎng)液試一試。我也經常碰到，我想可能是板的問題，換一個牌子的板或換用培養(yǎng)瓶就沒問題了。不知樓主所需換液的培養(yǎng)板多不多，換培養(yǎng)基的時候如果沒有注意風機的影響，特別是所需換液的培養(yǎng)板很多時，容易使細胞因風吹失水而干縮破裂。如果如此，換液時應該逐個培養(yǎng)板進行，別怕浪費吸管，注意操作的效率！
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