手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
BV2
常用的小膠質(zhì)細(xì)胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒（J2）感染原代小膠質(zhì)細(xì)胞而獲得永生化。BV2細(xì)胞表達(dá)非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過氧化物酶活性。這種細(xì)胞不僅會分泌溶菌酶，在適當(dāng)?shù)拇碳は?，還會分泌白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子。
此外，BV2細(xì)胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。
從表型上看，BV2細(xì)胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性，而對MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。
圖A. BV2細(xì)胞顯微照片，bar=30 μm.
圖B. 通過掃描電鏡觀察，在玻璃蓋板上培養(yǎng)的BV2細(xì)胞，bar=5 μm.
圖C. 通過透射電鏡觀察，BV2細(xì)胞的部分細(xì)胞質(zhì)吞噬iCA，bar=3 μm.
（圖片引用自文獻(xiàn)[1]）
在培養(yǎng)BV2細(xì)胞的時候，同學(xué)們最常遇到的問題就是生長形態(tài)異常。生長形態(tài)異常往往伴隨著細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞死亡等，導(dǎo)致實驗做不出結(jié)果，給大家?guī)碇刂乩_。
小普根據(jù)多年的實驗經(jīng)驗，為大家整理了這一現(xiàn)象可能發(fā)生的原因，及相應(yīng)解決方案。
首先我們來看看正常的BV2形態(tài)。結(jié)合眾多文獻(xiàn)和Procell的細(xì)胞圖片來看，BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，它的形態(tài)并不規(guī)則，存在圓形和梭形兩種。
懸浮細(xì)胞為圓形，貼壁細(xì)胞既有圓形也有梭形。由于圓形細(xì)胞折光率高，它的邊緣看起來是發(fā)亮的；梭形細(xì)胞則向兩端伸出黑色突起。
（圖片源自Procell）
那么，異常生長的BV2細(xì)胞有哪些形態(tài)呢？
如何根據(jù)不同的異常生長形態(tài)，調(diào)整改善培養(yǎng)條件，及時解決問題？
小普總結(jié)如下：
形態(tài)1：細(xì)胞全部飄起，*不貼壁
解析：分為培養(yǎng)基偏堿及復(fù)蘇后不貼壁兩種情況。
（1）培養(yǎng)基偏堿。培養(yǎng)瓶不透氣或者開封時間過長，培養(yǎng)基PH將增大，可見培養(yǎng)基呈紫紅色。BV2對培養(yǎng)基酸堿度較為敏感，在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時后將會全部飄起。
解決方案：給細(xì)胞換上新鮮配制的培養(yǎng)基，并使用透氣瓶。
（2）復(fù)蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復(fù)蘇操作過程，以及培養(yǎng)基是否存在問題。
解決方案：確保凍存前狀態(tài)良好及凍存復(fù)蘇操作規(guī)范，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，即可解決問題。
形態(tài)2：細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/strong>
解析：小膠質(zhì)細(xì)胞是一種可塑性*的細(xì)胞，可通過特定因素激活，從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過程中，小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。
實驗中常用細(xì)菌脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFNγ），分別模擬細(xì)菌和病毒感染，來刺激小膠質(zhì)細(xì)胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細(xì)胞突起縮短變厚，胞體增大，呈現(xiàn)阿米巴樣（如下圖所示）。
但有的時候BV2形態(tài)變化并不明顯，還需要結(jié)合其他實驗，如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達(dá)，來確定BV2是否被定向激活。
（圖片引用自文獻(xiàn)[2]）
如果細(xì)胞沒有受到任何刺激，就已經(jīng)呈現(xiàn)阿米巴樣，或者受刺激后，炎癥因子表達(dá)沒有差異，那么細(xì)胞有可能發(fā)生了自分化。
其原因可以從以下幾點考慮：
（1）存在潛在微生物污染，刺激細(xì)胞自分化。
解決方案：通過去掉培養(yǎng)基中的抗生素確定污染類型，并排查污染源頭。
（2）使用的胎牛血清內(nèi)毒素高，內(nèi)毒素刺激細(xì)胞自分化。
解決方案：嘗試使用超低內(nèi)毒素胎牛血清，或許能得到改善。
形態(tài)3：全都是分枝狀細(xì)胞，圓形細(xì)胞少
解析：這種形態(tài)往往伴隨著細(xì)胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細(xì)胞增殖速度較快，在圓形細(xì)胞缺失的狀況下，整體增殖速度就會減慢。
解決方案：由于BV2是一種半貼壁半懸浮細(xì)胞，貼壁和懸浮細(xì)胞的比例并不固定，當(dāng)懸浮細(xì)胞較多時，換液和傳代時要將懸浮細(xì)胞收集，避免圓形細(xì)胞的大量損失。
總而言之，BV2細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)與其生長環(huán)境息息相關(guān)，給細(xì)胞以最合適的環(huán)境，嚴(yán)格按照要求規(guī)范操作，細(xì)胞也將用好的狀態(tài)回報你。
參考文獻(xiàn)：
[1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.
Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.
Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.
J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)
[2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.
Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.
Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells.
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心